發(fā)布時間：2022-01-15 05:01

　　目的應(yīng)用Tet-On基因表達調(diào)控系統(tǒng)構(gòu)建Alb啟動子調(diào)控小型豬uPA （pig urokinase-type plasminogen activator,puPA）基因表達的慢病毒載體pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGFP（pLATTPUTG）。方法首先將pAlb-Cre-GH/BS作為模板,PCR擴增目的基因Alb-enhancer/promoter,In-Fusion克隆至Xho I/Xba I雙酶切的pLVX-TetOne中,獲得Alb啟動子替換pLVX-TetOne原有的PGK啟動子的質(zhì)粒pLVX-Alb-TetOne;接著以pCD823 A-1為模板,PCR擴增T2A-CopGFP,In-Fusion克隆至BamH I/Age I酶切的pLVX-Alb-TetOne中,獲得pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP（pLATTTG）;最后以H8803為模板,PCR擴增puPA（3′端含F(xiàn)lag標簽）,In-Fusion克隆至pLATTTG中,最終獲得慢病毒載體pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGF... 

【文章來源】：中國比較醫(yī)學雜志. 2019,29(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗材料
        1.1.1 載體
        1.1.2 細胞
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 實驗方法
        1.3.1 基于Tet-On3G系統(tǒng)構(gòu)建Alb啟動子調(diào)控小型豬uPA轉(zhuǎn)基因肝細胞特異性表達的慢病毒載體pLATTPUTG
        1.3.2 pLATTPUTG體外功能驗證
    1.4 統(tǒng)計學方法
2 結(jié)果
    2.1 慢病毒載體pLATTPUTG構(gòu)建和鑒定
        2.1.1 構(gòu)建載體pLVX-Alb-TetOne
        2.1.2 構(gòu)建載體pLATTTG
        2.1.3 載體pLATTPUTG構(gòu)建
    2.2 pLATTPUTG瞬時轉(zhuǎn)染293T細胞
    2.3 瞬時轉(zhuǎn)染pLATTPUTG的細胞中puPA、CopGFP和標簽蛋白Flag表達
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]構(gòu)建Alb啟動子調(diào)控HBEGF肝特異性表達的慢病毒載體及其功能驗證[J]. 賈俊雙,陳傍柱,林霞,劉宇,肖東,林曉琳.  嶺南現(xiàn)代臨床外科. 2016(03)
[2]用于肝臟疾病研究的人源化小鼠模型概述[J]. 任曉楠,周曉輝.  中國實驗動物學報. 2014(05)
[3]借助慢病毒將EGFP基因?qū)胛鞑匦⌒拓i胎兒成纖維細胞[J]. 張晟,肖高芳,黃黎珍,那順巴雅爾,賈俊雙,姚志芳,肖東,顧為望.  中國比較醫(yī)學雜志. 2010(04)
[4]Tetracycline-inducible Expression Systems: New Strategies and Practices in the Transgenic Mouse Modeling[J]. Yan SUN~(1,2) Xigu CHEN~1* Dong XIAO~2*1 Center of Experimental Animals,Sun Yar.Sen University,Guangzhou 510080,China;2 Institute of Comparative Medicine and Center of Experimental Animals,Southern Medical University Guangzhou 510515,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2007(04)
[5]Generation of the regulatory protein rtTA transgenic mice[J]. Kang Xu, Xin-Yan Deng, Ying Yue, Zhong-Min Guo, Bing Huang, Xun Hong, Dong Xiao, Xi-Gu Chen, Center of Experimental Animals, Sun Yat-Sen (Zhongshan) University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China Kang Xu, The First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University, Sun Yat-Sen (Zhongshan) University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(19)



本文編號：3589952