【目的】觀察脂多糖（LPS）對(duì)巨噬細(xì)胞自噬的影響及p38/MAPK通路在其中的作用�！痉椒ā矿w外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞株RAW264.7,分為對(duì)照組、饑餓狀態(tài)激活自噬組、單純LPS刺激組、LPS+P38抑制劑（SB203582）組和LPS+m TOR抑制劑（rapamycin）組。將前期構(gòu)建的載體pc DNA3.1-GFP-LC3,轉(zhuǎn)染RAW264.7,通過(guò)熒光顯微鏡觀察各組細(xì)胞中自噬體形成情況。q RT-PCR方法檢測(cè)各組中與細(xì)胞自噬相關(guān)的基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ和Bnip3 m RNA表達(dá)水平的改變。利用Western blotting檢測(cè)LC3-Ⅱ、p-P38、P38蛋白在各組中的表達(dá)情況,以評(píng)價(jià)LPS激活巨噬細(xì)胞自噬過(guò)程中p38/MAPK通路的作用�！窘Y(jié)果】在熒光顯微鏡下可以觀察到自噬在饑餓狀態(tài)組、LPS+SB203582組和LPS+rapamycin組有明顯增強(qiáng);q RT-PCR檢測(cè)到自噬相關(guān)基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ,和Bnip3 m RNA的表達(dá)在饑餓狀態(tài)組、LPS+SB203582組和LPS+rapamycin組有明顯增強(qiáng);Western blotting檢測(cè)發(fā)... 

【文章來(lái)源】：中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版). 2014,35(06)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組
        1.2.2 各組巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)
        1.2.3 穩(wěn)定表達(dá)GFP-LC3的RAW264.7細(xì)胞系的建立
        1.2.4 用q RT-PCR方法檢測(cè)與細(xì)胞自噬相關(guān)基因的m RNA表達(dá)水平
        1.2.5 在熒光顯微鏡下采用GFP-LC3融合蛋白來(lái)示蹤自噬形成
        1.2.6 利用Western blotting檢測(cè)LC3-Ⅱ、P38、p-P38的表達(dá)
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 穩(wěn)定表達(dá)GFP-LC3的RAW264.7細(xì)胞系的建立
    2.2 檢測(cè)各組巨噬細(xì)胞自噬情況
        2.2.1 q RT-PCR方法檢測(cè)與細(xì)胞自噬相關(guān)的基因m RNA的表達(dá)
        2.2.2 GFP-LC3融合蛋白示蹤自噬形成
        2.2.3 Western blotting檢測(cè)LC3-Ⅱ、p-P38、P38
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脂多糖通過(guò)PI3K/Akt/mTOR通路調(diào)控巨噬細(xì)胞自噬[J]. 杜濤,黃海,陳欣,丁紅,張睿,劉梅蘭,陳慧.  中國(guó)病理生理雜志. 2014(04)
[2]免疫治療對(duì)母胎交界面NK細(xì)胞表面CD69表達(dá)水平的影響及其與鼠胚和鼠仔預(yù)后的關(guān)系（英文）[J]. 林羿,曾耀英,曾山,何賢輝,狄靜芳,詹美意,關(guān)潔賓,肇靜嫻,全世明.  中國(guó)病理生理雜志. 2002(03)
[3]Immunomodulated signaling in macrophages: Studies on activation of Raf-1, MAPK, cPLA2 and secretion of IL-12[J]. 張宗梁,宋秋寶,林明群,丁躍梅,康小偉,姚錱.  Science in China（Series C:Life Sciences）. 1997(06)
[4]前列腺特異性膜抗原通過(guò)p38通路對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖、遷移的調(diào)控研究[J]. 杜濤,張一鳴,郭正輝,陳杰青,周詩(shī)麗,賴(lài)義明,曹億,畢良寬,林天歆,黃海.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2013 (12)



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