目的:對(duì)華支睪吸蟲（Clonorchis sinensis,Cs）成蟲酸性磷酸酶（acid phosphatase,AP）進(jìn)行克隆、表達(dá)、生物學(xué)特征分析、組織定位及膜抗原/排泄分泌抗原鑒定。方法:對(duì)Cs AP進(jìn)行生物信息學(xué)、分子生物學(xué)、免疫組化及明膠酶譜分析。結(jié)果:從Cs c DNA文庫(kù)中篩選出編碼AP新基因,全長(zhǎng)1 410 bp,重組并由大腸桿菌表達(dá)、純化,得到分子量為55 k D的重組蛋白Cs AP。Western blotting分析表明,Cs AP既是膜抗原又是分泌排泄抗原;免疫組化顯示,Cs AP熒光顯示于成蟲的表皮層和腸支,在囊蚴也有顯示,在雷蚴和尾蚴未顯示熒光;ELISA分析表明Cs AP識(shí)別華支睪吸蟲病人和日本血吸蟲病人存在吸蟲間的交叉免疫反應(yīng),Cs AP及粗抗原識(shí)別輕、中、重度感染程度華支睪吸蟲病人的差別不明顯。重組蛋白免疫大鼠后,總Ig G抗體滴度于3周達(dá)較高峰,抗體效價(jià)大于1∶25 600。明膠降解實(shí)驗(yàn)表明:Cs AP具降解膠原能力。結(jié)論:上述結(jié)果表明,Cs AP在大腸桿菌中高效表達(dá),具有較好的免疫原性,但血清診斷價(jià)值不理想;Cs AP可能既是膜抗原,又是排泄分泌... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)病理生理雜志. 2014,30(11)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
材料和方法
    1 Cs AP生物信息學(xué)分析
    2 Cs AP克隆、表達(dá)和純化
    3 C.sinensis排泄分泌抗原、粗抗原及膜蛋白的制備及GST標(biāo)簽蛋白的純化
    4 抗血清制備
    5 Western blotting分析
    6 Cs AP于C.sinensis各發(fā)育階段免疫組化定位
    7 健康及C.sinensis感染、日本血吸蟲 (Schistoso-ma japonicum, S.japonicum, Sj) 感染人血清
    8 明膠酶譜法分析Cs AP降解膠原能力
    9 ELISA
    1 0 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1 Cs AP生物信息學(xué)分析
    2 Cs AP在大腸桿菌BL21 E.coli表達(dá)與純化
    3 Cs AP重組蛋白Western blotting分析
    4免疫熒光分析Cs AP重組蛋白在C.sinensis的組織定位和發(fā)育時(shí)期定位
    5 Cs AP對(duì)膠原的降解作用
    6 Cs AP重組蛋白ELISA分析
討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]益骨膠囊含藥血清對(duì)大鼠破骨細(xì)胞凋亡和分泌抗酒石酸酸性磷酸酶的影響[J]. 舒曉春,張榮華,朱曉峰,彭柯萍.  中國(guó)病理生理雜志. 2003(09)
[2]免疫調(diào)節(jié)劑對(duì)大鼠巨噬細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化物和酸性磷酸酶的影響[J]. 呂建新,金麗琴,陳國(guó)榮,陳希賢,陸永綏,蔡勤.  中國(guó)病理生理雜志. 1999(02)



本文編號(hào)：3577911