目的·分析Fbxo22基因敲除小鼠的表型,為探索FBXO22的生物學(xué)功能提供理論依據(jù)。方法·利用CRISPR-Cas9（clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR associated protein 9）技術(shù)成功構(gòu)建Fbxo22全身敲除小鼠,觀察胚胎和小鼠的外觀,測定其數(shù)量和質(zhì)量,并分析小鼠的進食量和存活時間。結(jié)果·Fbxo22敲除小鼠胚胎期17.5/18.5 d的胚胎數(shù)量符合孟德爾遺傳定律,外觀未見異常,但是多數(shù)Fbxo22敲除小鼠在出生后48 h內(nèi)死亡。少數(shù)存活小鼠體型偏小,進食減少,存活時間縮短。結(jié)論·FBXO22對于小鼠出生后早期存活和正常發(fā)育有重要作用。 

【文章來源】：上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2019,39(04)北大核心CSCD

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Fbxo22敲除小鼠構(gòu)建及基因型鑒定Fig1GenerationofFbxo22knockoutmice注：A.sgRNA識別Fbxo22的3號外顯子示意

355http://xuebao.shsmu.edu.cn上海交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2019，39(4)2.2FBXO22缺失對胚胎發(fā)育以及出生后存活的影響為了檢測FBXO22對胚胎發(fā)育的影響，首先通過分析不同胚胎時期各個基因型胚胎的數(shù)量，觀察FBXO22缺失是否影響胚胎存活。在胚胎期14.5d（E14.5），F(xiàn)bxo22+/+、Fbxo22+/-和Fbxo22-/-的數(shù)量分別為28、53和21；在E17.5/18.5，F(xiàn)bxo22+/+、Fbxo22+/-和Fbxo22-/-的數(shù)量分別為29、46和27，符合孟德爾遺傳定律（表2）。此外，E13.5、E14.5和E17.5/18.5的胚胎外觀和E17.5/18.5的胚胎質(zhì)量均未見異常（圖3A和3B）。這些結(jié)果提示FBXO22缺失對胚胎數(shù)量、外觀和質(zhì)量無明顯影響，即對胚胎發(fā)育無明顯影響。然而，我們發(fā)現(xiàn)大量小鼠在出生后48h內(nèi)死亡。通過鑒定這些死亡小鼠和存活到3周齡的小鼠的基因型，發(fā)現(xiàn)87.27%的Fbxo22-/-小鼠在出生后48h內(nèi)死亡，而Fbxo22+/+與Fbxo22-/-小鼠死亡的比例僅為13.30%和17.85%（表3）。這些結(jié)果表明Fbxo22-/-小鼠在胚胎發(fā)育期無明顯異常而多數(shù)在出生后48h內(nèi)死亡，所以Fbxo22-/-成年小鼠得率非常低。注：A.sgRNA識別Fbxo22的3號外顯子示意圖。黑色方框所示為sgRNA靶向序列，PAM序列用藍色標記。B.F1代基因型分析。虛線代表缺失堿基，紅色代表插入堿基；插入（+）、缺失（-）情況在每一行的右端顯示；WT表示野生型，1#、2#、5#、6#分別為F1代小鼠編號。圖1Fbxo22敲除小鼠構(gòu)建及基因型鑒定Fig1GenerationofFbxo22knockoutmice圖2用Westernblotting方法驗證FBXO22在不同組織的表達情況Fig2ExpressionofFBXO22indifferenttissuesconfirmedbyWesternblotting表2FBXO22缺失對小鼠胚胎數(shù)量的影響（n）Tab2EffectofFBXO22deletiononthenumberofembryos(n)胚胎期Fbxo22+/+Fbxo22+/-Fbxo22-/-E14.5285321E17.5/18

356上海交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）2019,39(4)JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCE)Vol.39No.4Apr.20192.3FBXO22缺失對成年小鼠體型、進食以及生存期的影響少數(shù)Fbxo22-/-小鼠可存活到3周齡以上，進一步觀察FBXO22缺失對出生后小鼠的生長有無影響。Fbxo22-/-小鼠的體型和體質(zhì)量明顯小于Fbxo22+/+小鼠，約為后者的50%，并且Fbxo22-/-小鼠的毛色沒有Fbxo22+/+小鼠鮮亮，這提示FBXO22缺失可能導(dǎo)致小鼠生長遲緩（圖4A和4B）。此外，F(xiàn)bxo22-/-小鼠每日飼料用量約為Fbxo22+/+小鼠的50%，每日水用量亦少于Fbxo22+/+小鼠，表明FBXO22缺失后小鼠的進食量明顯減少（圖4C和4D）。此外，F(xiàn)bxo22-/-小鼠的存活時間為7～8周，顯著短于Fbxo22+/+小鼠（圖4E）。但是，如果小鼠3周齡時不離乳飼養(yǎng)，F(xiàn)bxo22-/-小鼠體質(zhì)量的增長速度與Fbxo22+/+小鼠無明顯差別（圖4F），并且Fbxo22-/-小鼠的生存期可明顯延長，約為21周（圖4G）。因此，F(xiàn)BXO22缺失可引起小鼠體型減小，體質(zhì)量減輕，進食量減少。注：A.E13.5、E14.5和E17.5/18.5的胚胎外觀；B.E17.5/18.5的胚胎質(zhì)量。圖3FBXO22缺失對胚胎發(fā)育的影響Fig3EffectofFBXO22deletiononembryonicdevelopment注：Fbxo22+/+和Fbxo22-/-成年小鼠的體型（A）、體質(zhì)量（B）、食物（C）和水（D）攝取量（n=7）以及生存期（E，n=4）。不離乳飼養(yǎng)的Fbxo22+/+和Fbxo22-/-成年小鼠的體質(zhì)量增長（F）和生存期（G，n=3）。①P=0.000，②P=0.003，③P=0.010，④P=0.025，與Fbxo22+/+組比較。圖4FBXO22缺失對小鼠體型、進食和生存期的影響Fig4EffectofFBXO22deletiononmousebodysize,foodintakeandsurvivalABAEBFCGD


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