觀察miR-7基因敲減（knockdown, KD）對LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響,并初步探討其機制。分別用0、50、100、200 ng/mL LPS刺激野生型（wild type, WT）小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞12 h,經(jīng)實時熒光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR, Real-time PCR）檢測發(fā)現(xiàn),隨著LPS刺激濃度的增加,巨噬細(xì)胞中miR-7的表達水平逐漸升高,且在100 ng/mL LPS濃度刺激下miR-7表達最顯著（P<0.01）。用100 ng/mL LPS處理miR-7 KD小鼠和WT小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞12 h,鏡檢觀察到巨噬細(xì)胞形態(tài)均由圓形變?yōu)殚L梭形,并伸出長長的偽足。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測巨噬細(xì)胞表面CD80和CD86分子的表達情況,結(jié)果顯示,LPS作用后,miR-7 KD小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞表面CD80和CD86的比例較WT小鼠顯著上調(diào)（P<0.05）。Real-time PCR和ELISA結(jié)果顯示,miR-7 KD小鼠巨噬細(xì)胞在LPS刺激后,炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-ɑ的表達... 

【文章來源】：現(xiàn)代免疫學(xué). 2019,39(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗動物
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)、培養(yǎng)
    1.4 LPS刺激巨噬細(xì)胞
    1.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測巨噬細(xì)胞表面分子的表達
    1.6 Real-time PCR檢測細(xì)胞內(nèi)炎性因子和miR-7 mRNA水平
    1.7 ELISA檢測血清中炎性因子水平
    1.8 Western blotting檢測細(xì)胞內(nèi)NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白表達情況
    1.9 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 LPS作用下WT小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞中miR-7基因的表達
    2.2 miR-7 KD小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞中miR-7基因的表達
    2.3 LPS作用下小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞的形態(tài)及表面分子的變化
    2.4 LPS作用下miR-7 KD小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞炎性因子的表達變化
    2.5 LPS作用下miR-7 KD小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞中NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的表達變化
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Damage-associated molecular patterns in inflammatory bowel disease: From biomarkers to therapeutic targets[J]. Hayandra Ferreira Nanini,Claudio Bernardazzi,Fernando Castro,Heitor Siffert Pereira de Souza.  World Journal of Gastroenterology. 2018(41)
[2]微小RNA-7基因敲減對LPS誘導(dǎo)的腦部炎癥的影響[J]. 岳東旭,趙娟娟,胡琳,陳慧子,丁濤,潘飛飛,陳超,郭萌萌,徐林.  現(xiàn)代免疫學(xué). 2018(05)
[3]MicroRNA-7基因敲減小鼠模型的鑒定[J]. 朱順飛,李永菊,陳超,胡燕,趙娟娟,郭萌萌,陶弋婧,秦娜琳,徐林.  遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2014(06)
[4]pG-miR-7-Sponge轉(zhuǎn)基因小鼠載體的構(gòu)建及鑒定[J]. 李永菊,周涯,陳超,朱順飛,胡燕,秦娜琳,鄭靜,徐林.  遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2014(02)



本文編號：3518668