以痘苗病毒為載體的溶瘤病毒作為癌癥治療的新方向效果顯著。同時,痘苗病毒還可以作為疫苗載體抵抗HIV、H5N1等病毒感染。因技術(shù)限制,重組痘苗病毒主要通過同源重組的方法獲得,但此方法獲得重組病毒的效率較低。隨著CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeat）-Cas9技術(shù)成功應(yīng)用于多種動物、組織和細(xì)胞的基因編輯中,本研究擬利用CRISPR-Cas9技術(shù)建立高效重組痘苗載體系統(tǒng)。本研究首先構(gòu)建了三個靶向痘苗病毒天壇株TK區(qū)的gRNA-Cas9的質(zhì)粒以及重組質(zhì)粒pJ2R-EGFP,通過瞬時轉(zhuǎn)染gRNA-Cas9或建立gRNA-Cas9穩(wěn)定細(xì)胞系后,導(dǎo)入重組質(zhì)粒pJ2R-EGFP并感染VTT,獲得表達(dá)EGFP的重組病毒。此高效重組痘苗病毒載體系統(tǒng)的重組效率比傳統(tǒng)的同源重組方法大大提高。因此,本研究建立的高效痘苗病毒載體重組系統(tǒng),為其在疫苗載體構(gòu)建、腫瘤免疫治療等方面提供參考價值。 

【文章來源】：病毒學(xué)報. 2019,35(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1病毒和細(xì)胞
    2 gRNA-Cas9質(zhì)粒的構(gòu)建及細(xì)胞系的建立
        2.1 px330載體中g(shù)RNA-Cas9質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2 Lenti-V2載體中g(shù)RNA-Cas9質(zhì)粒的構(gòu)建及細(xì)胞系的建立
    3重組質(zhì)粒pJ2R-EGFP的構(gòu)建
    4 Western Blot檢測Cas9蛋白表達(dá)
    5免疫熒光檢測Cas9蛋白定位
    6病毒的重組、純化及鑒定
結(jié)果
    1通過瞬時轉(zhuǎn)染gRNA-Cas9質(zhì)粒方法獲得重組病毒
        1.1 px330載體中g(shù)RNA-Cas9質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        1.2重組質(zhì)粒pJ2R-EGFP的構(gòu)建與鑒定
        1.3重組病毒的純化及鑒定
    2通過gRNA-Cas9細(xì)胞系獲得重組病毒
        2.1Lenti-delNLS-V2載體中g(shù)RNA-Cas9質(zhì)粒及細(xì)胞系的構(gòu)建與鑒定
        2.2細(xì)胞系中重組病毒的純化及驗證
討論



本文編號：3509703