本研究旨在制備針對瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白（CSP）保守Ⅱ⁺區(qū)及糖酵解途徑中的醛縮酶（ALD）的單克隆抗體，探索其用于子孢子檢測的可行性。 采用惡性瘧原蟲CSP保守Ⅱ⁺區(qū)多肽免疫BALB／c小鼠，獲得3株分泌針對保守Ⅱ⁺區(qū)的雜交瘤細(xì)胞株。ELISA檢測顯示獲得的單克隆抗體能與重組表達(dá)的惡性瘧原蟲CSP片段特異性反應(yīng)，與蚊蟲組織無反應(yīng)。間接免疫熒光試驗（IFA）顯示，單克隆抗體不僅能識別惡性瘧原蟲子孢子，也能識別約氏瘧原蟲子孢子，但與約氏瘧原蟲子孢子反應(yīng)的熒光強(qiáng)度明顯弱于與惡性瘧原蟲子孢子的反應(yīng)。 克隆惡性瘧原蟲海南株ALD編碼區(qū)基因，在大腸桿菌表達(dá)獲得可溶性蛋白。純化蛋白免疫BALB／c小鼠，獲得7株分泌針對ALD的雜交瘤細(xì)胞株。IFA顯示有4株能識別培養(yǎng)的惡性瘧原蟲，與惡性瘧原蟲有反應(yīng)的4株中有2株能識別約氏瘧原蟲。 該項研究的資料可為研究媒介體內(nèi)原蟲監(jiān)測以及有性期原蟲的糖代謝過程提供基礎(chǔ)資料。 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pQE一30圖譜

mMIPTG誘導(dǎo)表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)12%SDS一PAGE電泳，考馬斯亮藍(lán)染色。ALD的理論分子量約40.8kDa。誘導(dǎo)后在41kDa處出現(xiàn)特異性表達(dá)條帶，該條帶濃度隨誘導(dǎo)時間的延長而逐漸加深(圖6)。圖6大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)ALD的SDS一PAGE分析l對照組培養(yǎng)物(無IPTG)培養(yǎng)6h2蛋白標(biāo)志物(叨a)3一9IPTG誘導(dǎo)表達(dá)oh、lh、Zh、3h、4h、sh、6hF19.6AnalysisoftheALDProteinexPressedinM151Non一indueedM15withreeombinantPQE一30/ALDeulturedfor6h2proteinMarker(kDa)3一9M15withreeombinantPQE一30/ALDindueedforoh，lh，Zh，3h，4h，sh，6h3.純化表達(dá)產(chǎn)物擴(kuò)大培養(yǎng)sh后，收集菌體純化蛋白。超聲破菌后分別收集上清和沉淀，12%SDS一PAGE電泳顯示目的蛋白是以可溶性形式存在于大腸桿菌裂解后的上清中。上清液經(jīng)過濾、透析后過鎳—次氮基三醋酸(Ni一TA)柱。12%SDS一PAGE電泳顯示過柱后

化結(jié)果1洗滌液2柱后3洗脫液4總蛋白5蛋白質(zhì)標(biāo)志物nbyNi一NTA(kDa)1washingbuffer2afterthroughNi一NTAr4suPemantoflysis5TotalProteinofM156ProteinMar

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3503454