目的建立OmpA過表達(dá)慢病毒載體并觀察其對RAW264.7細(xì)胞NLRP3炎癥小體的激活。方法以鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC 19606為模板,設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增OmpA基因,將其克隆至慢病毒表達(dá)載體pCDH-MSCV-copGFP中。將此表達(dá)質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞包裝病毒,濃縮病毒上清液并用GFP報(bào)告基因法測定病毒滴度;用包裝病毒顆粒感染RAW264.7細(xì)胞48h,Real-time PCR法檢測OmpA的mRNA表達(dá)水平,用Western blot法檢測OmpA蛋白以及感染后NLRP3炎癥小體相關(guān)蛋白。結(jié)果成功構(gòu)建OmpA過表達(dá)慢病毒載體并在HEK293T細(xì)胞中包裝得到病毒,經(jīng)測定病毒滴毒為1.5×109 TU/mL;重組OmpA病毒感染RAW264.7細(xì)胞表達(dá)OmpA蛋白,該蛋白能引起NLRP3炎癥小體激活。結(jié)論成功構(gòu)建OmpA過表達(dá)慢病毒載體并證明OmpA可激活RAW264.7細(xì)胞NLRP3炎癥小體。 

【文章來源】：中國病原生物學(xué)雜志. 2019,14(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

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圖２慢病毒包裝ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞熒光檢測Ｆｉｇ．２ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＨＥＫ２９３Ｔｃｅｌｌｓｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]芩百清肺濃縮丸對肺炎支原體感染BALB/c小鼠NLRP3炎性體的影響[J]. 張涵,索緒斌,張?jiān)屏?姚琳,許慶瑞,張樹明,王偉明.  中國病原生物學(xué)雜志. 2017(10)



本文編號：3491407