恒河猴表皮干細胞及牙髓干細胞牙向分化的研究
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【摘要】:牙齒的發(fā)生是上皮和間充質相互作用的結果,那么構建生物工程牙齒也需要上皮和間充質組織的共同參與。2000年,Gronthos將人牙髓干細胞與HA/TCP支架孵育培養(yǎng)后,移植到裸鼠皮下可形成牙髓/牙本質復合體樣結構。另外2010年,Wang等從包皮中分離的表皮干細胞與小鼠E13.5天的磨牙間充質重組之后,可以發(fā)育形成一顆具有完整功能形態(tài)的牙齒。這一研究發(fā)現使得利用表皮干細胞、牙髓干細胞作為牙齒再生的種子細胞而備受重視。恒河猴是在進化上與人相近的靈長類動物,是基礎研究走向臨床首選的動物模型。雖然Rong Lu等已經成功分離恒河猴表皮干細胞,Huan等也已成功分離恒河猴牙髓干細胞。但對其在牙齒再生應用上的研究鮮有報道。因此對恒河猴表皮干細胞和牙髓干細胞牙向分化的進行研究具有重要意義。本研究選取恒河猴胚胎時期第7—8周,9-10周,11-12周的牙胚作為研究對象,HE染色后觀察其組織形態(tài)。發(fā)現第7-8周的牙胚處于蕾狀到帽狀的過渡時期,第9-10周的牙胚處于鐘狀期,第11-12周的牙胚處于分化期。同時還檢測了PITX2, FGF8, MSX1在這些時期的表達情況,結果顯示PITX2, FGF8, MSX1在這些時期的恒河猴牙胚中或多或少都有表達。本研究成功分離恒河猴表皮干細胞,并將第二代的恒河猴表皮十細胞與小鼠E13.5間充質重組之后,嵌合體發(fā)育形成具有完整功能形態(tài)的牙齒。同時本實驗也成功分離恒河猴牙髓干細胞,并證實其具有成脂成骨以及成牙分化潛能。這些證明了恒河猴表皮干細胞以及恒河猴牙髓干細胞均可作為種子細胞,實現牙齒再生。為利用干細胞重組實現牙齒再生從研究階段跨越到臨床應用階段做鋪墊。
【關鍵詞】:表皮干細胞 牙髓干細胞 牙齒再生
【學位授予單位】:福建師范大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2015
【分類號】:R329.2
【目錄】:
- 中文摘要2-3
- Abstract3-5
- 中文文摘5-10
- 緒論10-20
- 1. 牙齒發(fā)育10-15
- 1.1 哺乳動物的牙齒發(fā)育過程10-11
- 1.2 哺乳動物牙齒發(fā)育的分子機制11-15
- 2. 組織工程牙齒再生的研究15-18
- 2.1 表皮干細胞的研究16-17
- 2.2 牙髓干細胞的研究17
- 2.3 其他可用于牙齒再生種子細胞的研究17-18
- 3. 哺乳動物牙齒發(fā)育誘導潛能研究18-19
- 4. 研究意義19-20
- 第一章 材料與方法20-34
- 1.1 材料20-25
- 1.1.1 實驗動物20
- 1.1.2 實驗儀器20-21
- 1.1.3 實驗試劑21-24
- 1.1.4 試劑配制24-25
- 1.2 實驗方法與步驟25-34
- 第二章 結果34-48
- 2.1 恒河猴牙胚發(fā)育分化34-37
- 2.1.1 不同時期恒河猴牙胚的組織學形態(tài)34-35
- 2.1.2 一些牙齒發(fā)育相關基因在恒河猴牙胚的表達情況35-37
- 2.2 恒河猴表皮干細胞牙向分化的研究37-42
- 2.2.1 恒河猴表皮干細胞在恒河猴皮膚中的定位37-39
- 2.2.2 恒河猴表皮干細胞的分離培養(yǎng)39
- 2.2.3 恒河猴表皮干細胞的鑒定39-40
- 2.2.4 嵌合體牙齒組織形態(tài)的觀察及鑒定40-42
- 2.3 恒河猴牙髓干細胞的分離培養(yǎng)及其特性研究42-48
- 2.3.1 恒河猴牙髓干細胞的分離培養(yǎng)42-43
- 2.3.2 恒河猴牙髓干細胞的鑒定43-45
- 2.3.3 恒河猴牙髓干細胞多向分化潛能研究45-48
- 第三章 分析與討論48-54
- 3.1 恒河猴牙胚發(fā)育分化48-49
- 3.2 恒河猴表皮干細胞牙向分化的研究49-50
- 3.3 恒河猴牙髓干細胞的分離培養(yǎng)及其特性研究50-54
- 第四章 結論54-56
- 附錄156-58
- 參考文獻58-64
- 攻讀學位期間承擔的科研任務與主要成果64-66
- 致謝66-68
- 個人簡歷68-72
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