丙型肝炎病毒的基因組是一條9.4kb的單股正鏈RNA分子。HCV-NS4A編碼二個(gè)病毒多肽：NS4A和NS4B。HCV-NS4A蛋白作為一種非結(jié)構(gòu)形式，主要的生物學(xué)功能是作為NS3絲氨酸蛋白酶的輔助因子，在HCV多蛋白的成熟過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用；NS4B的功能目前尚無確切資料。我們克隆了NS4區(qū)部分基因，進(jìn)行了表達(dá)、純化，研究了NS4抗原的作用特點(diǎn)。本課題分以下三部分進(jìn)行： 第一部分：丙型肝炎病毒NS4片段的克隆 以HCV-J質(zhì)粒為模板，設(shè)計(jì)引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增獲取NS4基因片段（4U4D）；將PCR產(chǎn)物克隆到PMD18-T中，再將該片段用BamHI和KpnI雙酶切定向克隆到PQE30載體中，構(gòu)建PQE30-4U4D重組質(zhì)粒。經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定，目的基因克隆結(jié)果正確。 第二部分：丙型肝炎病毒NS4基因片段的原核表達(dá)與純化 將PQE30-4U4D重組質(zhì)粒導(dǎo)入M15菌，培養(yǎng)、IPTG誘導(dǎo)、離心、收集菌體、超聲粉碎、粗純化，12％SDS-PAGE對(duì)培養(yǎng)物分析表達(dá)相對(duì)分子量Mr約25KD的可溶性蛋白，其氨基端有6個(gè)組氨酸，以Ni-NTA柱親和層析純化。 第三部分... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮寫
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 HCV NS4基因片段的克隆
    一、 材料
    二、 方法
    三、 結(jié)果
    四、 討論
第二部分 HCV NS4基因片段的原核表達(dá)
    一、 材料
    二、 方法
    三、 結(jié)果
    四、 討論
第三部分 HCV NS4基因片段的免疫反應(yīng)性分析
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
綜述



本文編號(hào)：3488822