目的探討呼吸道合胞病毒（RSV）感染氣道上皮細(xì)胞后對表皮生長因子受體（EGFR）、緊密連接相關(guān)蛋白o(hù)ccludin及E-cadherin、黏蛋白MUC5AC表達(dá)的影響,并探討可能的機(jī)制。方法體外實(shí)驗(yàn)分兩組,以人氣道黏液上皮細(xì)胞NCI-H292細(xì)胞為研究對象,紫外線下滅活的RSV加入NCI-H292細(xì)胞培養(yǎng)基中作為對照組,迅速解凍的RSV感染NCI-H292細(xì)胞為RSV感染組。48 h后通過Western blot法檢測occludin、E-cadherin、磷酸化EGFR（p-EGFR）及EGFR的蛋白表達(dá)水平;采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)觀察兩組細(xì)胞occludin、E-cadherin的分布及表達(dá);采用RT-PCR法檢測兩組MUC5AC mRNA的表達(dá)。結(jié)果 RSV感染組occludin、E-cadherin的蛋白表達(dá)水平較對照組下降（P<0.05）。RSV感染組p-EGFR及EGFR蛋白的表達(dá)水平較對照組升高（P<0.05）。RSV感染組MUC5AC mRNA表達(dá)水平較對照組增加（P<0.05）。結(jié)論 RSV可破壞氣道上皮細(xì)胞間的緊密連接,促進(jìn)黏蛋白的分泌,影響氣道的屏... 

【文章來源】：中國當(dāng)代兒科雜志. 2019,21(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

Westernblot法檢測兩組occludin及E-cadGAPDH

第21卷第3期2019年3月中國當(dāng)代兒科雜志ChinJContempPediatrVol.21No.3Mar.2019·297·對照組對照組RSV感染組RSV感染組圖3Westernblot法檢測兩組p-EGFR及EGFR蛋白的表達(dá)變化左圖為蛋白電泳條帶圖；右圖為兩組目的蛋白表達(dá)統(tǒng)計(jì)圖（n=3），a示與對照組比較，P<0.05。圖4RT-PCR法檢測兩組MUC5ACmRNA的表達(dá)左圖為PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的凝膠電泳圖，M：Marker，1：對照組，2：RSV感染組；右圖為MUC5ACmRNA相對表達(dá)量統(tǒng)計(jì)圖（n=3），a示與對照組比較，P<0.05。p-EGFREGFRGAPDH圖2免疫熒光染色法檢測RSV感染NCI-H292細(xì)胞48h后occludin及E-cadherin的表達(dá)變化（×300）左圖為細(xì)胞免疫熒光圖，綠色熒光為目的蛋白的陽性表達(dá)；RSV感染組occludin及E-cadherin的陽性表達(dá)均弱于對照組。右圖為兩組目的蛋白平均熒光強(qiáng)度統(tǒng)計(jì)圖（n=3），a示與對照組比較，P<0.01。occludinE-cadherin對照組RSV感染組3討論RSV感染組EGFR的磷酸化水平明顯增加，提示RSV可致EGFR活化。EGFR定位于細(xì)胞膜基底外側(cè)，其胞內(nèi)區(qū)有酪氨酸激酶活性，當(dāng)配體與EGFR結(jié)合導(dǎo)致受體自身的酪氨酸殘基磷酸化，可募集相關(guān)信號轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，激活下游信號通路。RSV介導(dǎo)的EGFR活化可導(dǎo)致下游ERK活性增加，促進(jìn)IL-8釋放并抑制RSV感染細(xì)胞的凋亡[12]；可抑制干擾素調(diào)節(jié)因子1依賴性干擾素-λ的產(chǎn)生，增加RSV的感染滴度，而抑制EGFR活化能降低病毒的感染滴度[13]。上述發(fā)現(xiàn)提示抑制EGFR的300bp500bp300bp500bpMUC5ACGAPDHM12平均免疫熒光強(qiáng)度蛋白相對表達(dá)量MUC5ACmRNA相對表達(dá)量0.080.060.040.0200.60.40.200.50.40.30.20.10occludinEGFRE-cad

第21卷第3期2019年3月中國當(dāng)代兒科雜志ChinJContempPediatrVol.21No.3Mar.2019·297·對照組對照組RSV感染組RSV感染組圖3Westernblot法檢測兩組p-EGFR及EGFR蛋白的表達(dá)變化左圖為蛋白電泳條帶圖；右圖為兩組目的蛋白表達(dá)統(tǒng)計(jì)圖（n=3），a示與對照組比較，P<0.05。圖4RT-PCR法檢測兩組MUC5ACmRNA的表達(dá)左圖為PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的凝膠電泳圖，M：Marker，1：對照組，2：RSV感染組；右圖為MUC5ACmRNA相對表達(dá)量統(tǒng)計(jì)圖（n=3），a示與對照組比較，P<0.05。p-EGFREGFRGAPDH圖2免疫熒光染色法檢測RSV感染NCI-H292細(xì)胞48h后occludin及E-cadherin的表達(dá)變化（×300）左圖為細(xì)胞免疫熒光圖，綠色熒光為目的蛋白的陽性表達(dá)；RSV感染組occludin及E-cadherin的陽性表達(dá)均弱于對照組。右圖為兩組目的蛋白平均熒光強(qiáng)度統(tǒng)計(jì)圖（n=3），a示與對照組比較，P<0.01。occludinE-cadherin對照組RSV感染組3討論RSV感染組EGFR的磷酸化水平明顯增加，提示RSV可致EGFR活化。EGFR定位于細(xì)胞膜基底外側(cè)，其胞內(nèi)區(qū)有酪氨酸激酶活性，當(dāng)配體與EGFR結(jié)合導(dǎo)致受體自身的酪氨酸殘基磷酸化，可募集相關(guān)信號轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，激活下游信號通路。RSV介導(dǎo)的EGFR活化可導(dǎo)致下游ERK活性增加，促進(jìn)IL-8釋放并抑制RSV感染細(xì)胞的凋亡[12]；可抑制干擾素調(diào)節(jié)因子1依賴性干擾素-λ的產(chǎn)生，增加RSV的感染滴度，而抑制EGFR活化能降低病毒的感染滴度[13]。上述發(fā)現(xiàn)提示抑制EGFR的300bp500bp300bp500bpMUC5ACGAPDHM12平均免疫熒光強(qiáng)度蛋白相對表達(dá)量MUC5ACmRNA相對表達(dá)量0.080.060.040.0200.60.40.200.50.40.30.20.10occludinEGFRE-cad

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]E-cadherin在EGFR分子靶向治療中作用的研究進(jìn)展[J]. 邢榮春,鄭軍,劉偉,姚汝鋮.  肝膽胰外科雜志. 2013(02)



本文編號：3485386