目的：找出在隨機(jī)七肽庫(kù)中能與中和bFGF活性的抗體-GF22結(jié)合的保守序列，在bFGF分子上找出該抗原決定簇的位點(diǎn)，分析其序列，結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。同時(shí)檢驗(yàn)這種抗原決定簇是否能作為一種免疫抗原誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生能與BFGF結(jié)合的抗體，以及該抗原決定簇是否直接結(jié)合到bFGF受體上，從而探討短肽作為腫瘤疫苗和腫瘤特異定位標(biāo)志的應(yīng)用前景。 方法：以能中和bFGF活性的抗體GF22作為目標(biāo)（target），用隨機(jī)七肽噬菌體庫(kù)進(jìn)行篩選，經(jīng)三次篩選后用點(diǎn)雜交進(jìn)行陽(yáng)性克隆鑒定，用競(jìng)爭(zhēng)ElISA分析不同克隆對(duì)GF22的親和性。用不同噬菌體克隆免疫小鼠，分析不同克隆誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生抗-bFGF抗體的能力。把不同性質(zhì)的克隆測(cè)序，找出及分析其保守序列和其可能的結(jié)構(gòu)。應(yīng)用細(xì)胞免疫組化方法檢測(cè)若干含有保守序列的噬菌體克隆能否結(jié)合在已知表達(dá)BFGF受體的細(xì)胞NIH3T3上。 結(jié)果：經(jīng)三輪篩選后陽(yáng)性率達(dá)到90％，都能特異性地抑制bFGF結(jié)合到GF22上；測(cè)序結(jié)果顯示序列LP（P/L）GH（F/I）K高度保守，同源性分析顯示序列PPGHFK與bFGF分子22-27位氨基酸相同，而H（F/I）K則與bFGF分子的59-... 

【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：110 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
    噬菌體展示技術(shù)的特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)
    bFGF的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特點(diǎn)
    用噬菌體展示技術(shù)對(duì)bFGF進(jìn)行抗原決定簇定位的意義
    研究的目的和方向
實(shí)驗(yàn)所需器材與試劑
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及步驟
    噬菌體庫(kù)的篩選
    點(diǎn)雜交-陽(yáng)性克隆的鑒定
    競(jìng)爭(zhēng)ELISA
    檢驗(yàn)短肽的免疫原性
    測(cè)序
    細(xì)胞免疫組化
實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
    噬菌體庫(kù)的篩選
    點(diǎn)雜交-陽(yáng)性克隆的鑒定
    競(jìng)爭(zhēng)ELISA
    檢驗(yàn)短肽的免疫原性
    測(cè)序
    細(xì)胞免疫組化
討論
    bFGF的杭原決定簇
    抗原決定簇的免疫原性
    抗原決定簇與受體結(jié)合位點(diǎn)的關(guān)系
    存在問題及研究展望
總結(jié)
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    結(jié)論
參考文獻(xiàn)
鳴謝
已發(fā)表文章
附錄
    ProParam
    SYFPETHI
    Amino Acid Hydrophobicity Index
    Sequencing result
    Charaterization of bFGF，bFGF signaing pathway and strategies for drug discovery



本文編號(hào)：3468586