目的 克隆小鼠干擾素γ受體β（Ifngr2）基因啟動子，并應用雙熒光素酶報告系統(tǒng)對其進行功能分析。方法 首先應用歐洲啟動子在線數(shù)據(jù)庫（EPD）獲得小鼠Ifngr2 基因的啟動子區(qū)域，包含轉(zhuǎn)錄起始位點在內(nèi)的-1344⁺48的DNA序列。然后以小鼠MEF細胞基因組DNA為模板，利用PCR擴增調(diào)取該序列，并進一步插入 p GL4.19-luc2CP 熒光素酶報告載體。通過 PCR 擴增獲得啟動子系列截短體并分別插入p GL4.19-luc2CP載體，共獲得包含6個不同長度啟動子序列的熒光素酶報告載體。進一步通過雙熒光報告實驗檢測不同截短體對Ifngr2基因轉(zhuǎn)錄活性影響，確定其影響轉(zhuǎn)錄活性的關(guān)鍵區(qū)域。通過點突變探究潛在轉(zhuǎn)錄因子對Ifngr2基因轉(zhuǎn)錄的影響。結(jié)果 成功構(gòu)建小鼠Ifngr2基因啟動子熒光素酶報告載體，獲得有轉(zhuǎn)錄活性的啟動子報告基因載體。啟動子系列截短分析顯示，-132^-97 和-1059^-727 包含啟動子重要元件。生物信息學分析發(fā)現(xiàn)，在-132^-97 區(qū)域內(nèi)存在潛在的 NF-κB 結(jié)合位點，進... 

【文章來源】：中國藥理學與毒理學雜志. 北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁


本文編號：3467727