目的構(gòu)建表達(dá)水痘帶狀皰疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）gE抗原的重組腺病毒載體疫苗,并對(duì)其免疫原性進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法采用AdEasy系統(tǒng)構(gòu)建攜帶gE基因的重組腺病毒質(zhì)粒pAdEasy-gE,PCR及Western blot法鑒定AD293細(xì)胞系包裝的重組腺病毒rAd-gE,采用陰離子和復(fù)合介質(zhì)Capto Core 700兩步法對(duì)其進(jìn)行純化。以3. 3×10⁶、1×10⁷、3×10⁷ifu劑量的rAd-gE分別單針肌內(nèi)注射免疫NIH小鼠,檢測(cè)小鼠血清抗體滴度。結(jié)果 PCR及PacⅠ酶切鑒定表明,攜帶gE基因的pAdEasy-gE構(gòu)建成功;PCR及Western blot分析顯示,AD293細(xì)胞系成功包裝可表達(dá)gE糖蛋白的rAd-gE;經(jīng)兩步法純化,可回收18. 2%的rAd-gE。1×10⁷和3×10⁷ ifu劑量的rAd-gE可引起小鼠的體液免疫響應(yīng)。結(jié)論已成功構(gòu)建表達(dá)高度糖基化gE糖蛋白的rAd-gE,可有效引起小鼠的體液免疫響應(yīng),為VZV新型重組腺... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2019,32(01)CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒、細(xì)胞及菌株
    1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.3 主要試劑及儀器
    1.4 引物設(shè)計(jì)及合成
    1.5 重組腺病毒穿梭質(zhì)粒pS-C-g E的構(gòu)建及鑒定
    1.6 質(zhì)粒pAdEasy-g E的構(gòu)建及鑒定
    1.7 rAd-g E的包裝
    1.8 目的糖蛋白rAd-g E表達(dá)的鑒定
    1.9 rAd-g E的擴(kuò)增及純化
    1.1 0 小鼠免疫原性檢測(cè)
    1.1 1 小鼠血清抗體水平的檢測(cè)
    1.1 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 質(zhì)粒pS-C-g E的鑒定
    2.2 質(zhì)粒pAdEasy-g E的鑒定
    2.3 rAd-g E的鑒定
    2.4 純化的rAd-g E的鑒定
    2.5 rAd-g E的免疫原性
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