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腸出血性大腸桿菌O157:H7(EHEC O157:H7)基因工程雙亞單位融合蛋白疫苗的實(shí)驗(yàn)研究

發(fā)布時(shí)間:2021-10-21 21:40
  腸出血性大腸桿菌(EHEC)O157:H7是一種重要的新發(fā)傳染病病原菌。自1975年被首次分離、1982年被確認(rèn)為致病菌以來(lái)的20多年中,世界各地包括中國(guó)都有不同規(guī)模的暴發(fā)流行。EHEC O157:H7感染可使人患腹瀉、出血性結(jié)腸炎(hemorrhagic colitis, HC),還可在5~10%的病例中引發(fā)溶血性尿毒綜合征(hemolytic uremic syndrome, HUS)及血栓性血小板減少紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura, TTP)等嚴(yán)重并發(fā)癥,嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡。EHEC O157的感染因具有暴發(fā)流行趨勢(shì)、強(qiáng)烈的致病性與致死性和抗生素治療可加劇病情的危險(xiǎn)性等特點(diǎn),已經(jīng)成為全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。目前EHEC O157:H7的全基因組測(cè)序已經(jīng)完成,但對(duì)其感染仍缺乏有效的防治方法,研究證明:抗生素可促使O157菌釋放致死性志賀毒素(Stx),從而使患者并發(fā)HUS的危險(xiǎn)性增加。人類同傳染病斗爭(zhēng)的歷史表明,疫苗是人類戰(zhàn)勝傳染病的有力武器。由于O157的暴發(fā)流行和治療上的困難,疫苗研究就顯得尤其緊迫。 O157:H7及其它出血性大... 

【文章來(lái)源】:中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】:97 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

腸出血性大腸桿菌O157:H7(EHEC O157:H7)基因工程雙亞單位融合蛋白疫苗的實(shí)驗(yàn)研究


一陰離子交換柱層析純化包涵體的SDS一PAGE分析

序列,重組蛋白表達(dá),測(cè)序,碩士學(xué)位論文


第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文索序列一致。測(cè)序報(bào)告見(jiàn)附圖2,測(cè)序結(jié)果如下:ATGGGCAI,GAAGAAGATGTTTATGGCGGTTTTATTTGCATTAGCTTCTGTTA戶a,GCAATGGCGGCGGArTGTGCTAAAG咤.ATAAI,GAGGATGACACAI,TTACAGTGAAGGTTGACGGGAAAGAAI,CTGCAACCGTTACTGCAAAGTGCTCAGTTGACAGGAAI,GJ詼CCTGTGAAI

重組質(zhì)粒,酶切鑒定,叩甲


二、stxZb基因pMD18一丁重組質(zhì)粒的酶切鑒定pMD18一T重組質(zhì)粒經(jīng)Ncol+N甘‘I雙酶切后,目的片段大小約3O0bP,載體片段大小與pMD18一T空質(zhì)粒單酶切產(chǎn)物一致,初步說(shuō)明stxZb重組成功,如圖3一2所示。陽(yáng)性重組質(zhì)粒命名為pMD18一stxZb。1234PMD18一TdigestedbyNcol2一3:PMD18一stxZbdoubledigestedbyNcolandNdel4:100bPDNAladder們。arker重組質(zhì)粒酶切鑒定PP﹄七七叩甲,‘00000b腸3-:5000],二,二5,二牙二Fig3一2IdentifieationofreeombinantPlas而ds三、重組質(zhì)粒pET28。(+)一st、Zb一eaeC3OO的鑒定重組質(zhì)粒PET28a(+)一stxZb一eaeC3oo分別用Ncol+N漢‘I、Ndel+Xhol和雙酶切后,進(jìn)行1.0%瓊脂糖凝膠電泳(圖3一3所示),顯示目的條帶依次為:900bp、1200bp,與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的酶切片段大小相符,初步證實(shí)為重組克隆。12345678Ncol+Xhol300bP、l姍韶900bP500bP300bP100bP1.2:reeombinantPlas而dPET28a(+)一stxZb一eaeC300doubledigestedbyNcol+入以亡L(300bP)3.6:l0()bPDNAladdermarker4.5:reeombinant

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]O157:H7大腸桿菌流行病學(xué)研究概況[J]. 汪華,史智揚(yáng).  江蘇衛(wèi)生保健. 2001(01)
[2]大腸桿菌O157:H7感染的病原學(xué)與流行病學(xué)[J]. 李升團(tuán),韓光紅.  解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 1997(05)



本文編號(hào):3449763

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