白細(xì)胞介素-3（IL-3）又稱多能造血因子。是由活化的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的一種淋巴因子，它不僅在調(diào)節(jié)機(jī)體造血過程中起重要作用。而且它的產(chǎn)生失調(diào)可能與某些腫瘤的發(fā)生有關(guān)，因此利用基因工程手段有效表達(dá)人IL-3，必將促進(jìn)基礎(chǔ)與臨床研究的進(jìn)展，本研究利用PCB技術(shù)快速分離、克隆了入IL-3 cDNA，并完成了一類新型逆轉(zhuǎn)錄病毒IL-3表達(dá)載體的構(gòu)建，在小鼠骨髓瘤細(xì)胞中成功地表達(dá)了具有完整生物活性的人IL-3，為進(jìn)一步研究造血細(xì)胞分化的機(jī)制以及探索臨床應(yīng)用的前景打下基礎(chǔ)。 從人扁挑腺分離淋巴細(xì)胞，加入PHA-P、TPA培養(yǎng)24小時(shí)后用氯化銫密度銻度離心法分離細(xì)胞總BNA，逆轉(zhuǎn)錄合成第一條cDNA鏈做為PCB反應(yīng)的模板。由全自動(dòng)DNA1合成儀（ABI）分別合成兩個(gè)27bp的引物，在其5’端分別包含一個(gè)限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)（BamHⅠ，HindⅢ），合成后的DNA引物經(jīng)OPC柱純化。應(yīng)用Cetus PCB擴(kuò)增體系，反應(yīng)總體積為100ul，1xPCB緩沖液，200uM的dNTP（dATP，dCTP，dGTP，dTTP），適當(dāng)調(diào)節(jié)兩個(gè)引物的反應(yīng)濃度，2.5u Tag DNA聚合酶。反應(yīng)首先在94℃變性2... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
一、中文摘要
二、英文摘要
三、綜述
四、前言
五、實(shí)驗(yàn)材料
六、實(shí)驗(yàn)方法
七、結(jié)果
八、討論
九、結(jié)論
十、致謝
十一、參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3440184