發(fā)布時間：2021-10-12 17:04

　　目的探究usp9y與引起該小鼠不育表型的突變基因Nna1之間的關(guān)系,以及該基因在精子發(fā)生中的影響。方法用分子克隆法構(gòu)建pEGFP-usp9y-（nt1558-1955）真核表達載體,轉(zhuǎn)染到HEK293T細胞中,檢測其表達;將pEGFP-usp9y-（nt1558-1955）和pCMV-Myc-Nna1共轉(zhuǎn)染至HEK293T細胞中,通過免疫共沉淀法分析usp9y和Nna1蛋白之間的相互作用;運用單基因表達譜法研究浦肯野細胞變性（pcd）小鼠中usp9y基因、與精子發(fā)生相關(guān)基因和信號通路關(guān)鍵因子的表達。結(jié)果 usp9y與Nna1可形成免疫沉淀復(fù)合物;pcd3J突變型小鼠睪丸組織中Nna1表達下調(diào),usp9y表達量明顯增高。結(jié)論二者之間存在一定的相互作用,可能共同參與小鼠的精子發(fā)生,但作用方式不明確;NF-κB細胞信號通路等可能參與了pcd小鼠的精子發(fā)生。 

【文章來源】：實用醫(yī)學(xué)雜志. 2019,35(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑
    1.2 磁性轉(zhuǎn)染
    1.3重組載體構(gòu)建
    1.4 質(zhì)粒提取
    1.5 免疫共沉淀
    1.6 pcd小鼠基因型檢測
    1.7 小鼠睪丸組織表達譜分析
    1.8 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 pCMV6-Myc-DDK-usp9y質(zhì)粒的表達情況
    2.2 蛋白水平上pCMV6-Myc-DDK-usp9y質(zhì)粒的表達檢測
    2.3 pEGFP-usp9y- (nt1558-1955) 表達載體的構(gòu)建
    2.4 重組質(zhì)粒的驗證
    2.5 Western Blot檢測重組質(zhì)粒表達
    2.6 免疫共沉淀實驗檢測usp9y與Nna1蛋白的相互作用
    2.7 單分子基因表達譜分析結(jié)果
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]泛素特異性加工酶2的研究進展[J]. 茅幸,張志剛,吳慧娟.  國際病理科學(xué)與臨床雜志. 2012(05)



本文編號：3432974