弓形蟲全球分布，能引起人獸共患的弓形蟲病。該病的人群感染極為普遍，人群感染率約為25％-50％。孕婦孕期首次感染弓形蟲后可導(dǎo)致早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育畸形。弓形蟲病也是最常見的機(jī)會性寄生蟲病，腫瘤患者體內(nèi)抗弓形蟲抗體陽性率高達(dá)63％；HIV／AIDS人群抗弓形蟲抗體陽性率分別為44.8％和95.0％，該病已成為免疫功能嚴(yán)重低下患者的主要死亡原因。此外，由弓形蟲引起的禽畜類疾病也給畜牧業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。迄今尚無治療弓形蟲病的特效藥物，因此研制安全有效的疫苗極為迫切。弓形蟲生活史較復(fù)雜，抗原成分具有發(fā)育階段的特異性或差異性。因此成功的弓形蟲疫苗應(yīng)針對多個特異性抗原，所產(chǎn)生的保護(hù)性免疫力需針對生活史中一個以上的感染階段。SAG1為弓形蟲速殖子期特異的主要表面抗原之一，具有高度的免疫原性和免疫保護(hù)性，是弓形蟲疫苗開發(fā)的主要抗原。ROP2（Rhoptry2）蛋白是弓形蟲棒狀體分泌的一種蛋白，主要協(xié)助蟲體入侵宿主細(xì)胞，在弓形蟲生活史的速殖子期、緩殖子期和子孢子期中均有表達(dá)，具有高度的保守性和免疫原性。SAG1和ROP2在蟲體入侵宿主的過程中相互促進(jìn)，其相應(yīng)的抗體可有效拮抗弓形蟲感染。同時，為攻克... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ROPZ基因TA一C10ning的構(gòu)建及鑒定決.純化的R()PZ尸CR產(chǎn)物;2.ROPZ一TACloning質(zhì)粒的雙酶切鑒定;3.DNAMarkor

條帶:一條位于約5400bp位置，與peDNA3.l空質(zhì)粒經(jīng)相同酶切后的電泳結(jié)果相同:另一條位于約1000bp位置，此片段長度與ROPZ片段長度(1042bp)相當(dāng)(見圖2)。3· 2peDNA3.l一ROPZ的PCR鑒定PcDNA3.1一ROPZ質(zhì)粒經(jīng)PCR擴(kuò)增，電泳結(jié)果示:在位于約IO00bP位置有一明顯的條帶，此片段長度與ROPZ片段長度 (1042bP)相當(dāng)，也與pcDNA3.1一ROPZ質(zhì)粒雙酶切鑒定的結(jié)果一致(見圖2)。以上兩結(jié)果均表明:目的基因ROPZ已正確插入到質(zhì)粒PcDNA3.1的EcoRI、Handlll兩酶切位點之間。4.測序結(jié)果測序公司測序分2個循環(huán):利用質(zhì)粒peDNA3.1的通用引物M13R介48)來進(jìn)行正向測序，(見測序結(jié)果圖1);利用質(zhì)粒pcDNA3.1的通用引物M13F(一47)來進(jìn)行反向測序(見測序結(jié)果圖2)。結(jié)果示:測序核昔酸序列與文獻(xiàn)報道的ROPZ基因序列一致，表明我們成功克隆出含ROPZ的基因序列。

B的PCR鑒定B質(zhì)粒經(jīng)PCR擴(kuò)增，電泳結(jié)果示度與CTAZ/B片段長度(516bp)相果一致(見圖5)。明:目的基因CTAZ/B己正確插入間。粒pcDNA3.1的通用引物M13RC序核普酸序列與文獻(xiàn)報道的CrA基因序列。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]弓形蟲ROP1基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒免疫小鼠后的免疫應(yīng)答[J]. 郭虹,陳觀今,鄭煥欽,周永安,呂芳麗.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 1999(06)



本文編號：3423095