弓形蟲(chóng)全球分布，能引起人獸共患的弓形蟲(chóng)病。該病的人群感染極為普遍，人群感染率約為25％-50％。孕婦孕期首次感染弓形蟲(chóng)后可導(dǎo)致早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育畸形。弓形蟲(chóng)病也是最常見(jiàn)的機(jī)會(huì)性寄生蟲(chóng)病，腫瘤患者體內(nèi)抗弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率高達(dá)63％；HIV／AIDS人群抗弓形蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率分別為44.8％和95.0％，該病已成為免疫功能?chē)?yán)重低下患者的主要死亡原因。此外，由弓形蟲(chóng)引起的禽畜類(lèi)疾病也給畜牧業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。迄今尚無(wú)治療弓形蟲(chóng)病的特效藥物，因此研制安全有效的疫苗極為迫切。弓形蟲(chóng)生活史較復(fù)雜，抗原成分具有發(fā)育階段的特異性或差異性。因此成功的弓形蟲(chóng)疫苗應(yīng)針對(duì)多個(gè)特異性抗原，所產(chǎn)生的保護(hù)性免疫力需針對(duì)生活史中一個(gè)以上的感染階段。SAG1為弓形蟲(chóng)速殖子期特異的主要表面抗原之一，具有高度的免疫原性和免疫保護(hù)性，是弓形蟲(chóng)疫苗開(kāi)發(fā)的主要抗原。ROP2（Rhoptry2）蛋白是弓形蟲(chóng)棒狀體分泌的一種蛋白，主要協(xié)助蟲(chóng)體入侵宿主細(xì)胞，在弓形蟲(chóng)生活史的速殖子期、緩殖子期和子孢子期中均有表達(dá)，具有高度的保守性和免疫原性。SAG1和ROP2在蟲(chóng)體入侵宿主的過(guò)程中相互促進(jìn)，其相應(yīng)的抗體可有效拮抗弓形蟲(chóng)感染。同時(shí)，為攻克... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ROPZ基因TA一C10ning的構(gòu)建及鑒定決.純化的R()PZ尸CR產(chǎn)物;2.ROPZ一TACloning質(zhì)粒的雙酶切鑒定;3.DNAMarkor

條帶:一條位于約5400bp位置，與peDNA3.l空質(zhì)粒經(jīng)相同酶切后的電泳結(jié)果相同:另一條位于約1000bp位置，此片段長(zhǎng)度與ROPZ片段長(zhǎng)度(1042bp)相當(dāng)(見(jiàn)圖2)。3· 2peDNA3.l一ROPZ的PCR鑒定PcDNA3.1一ROPZ質(zhì)粒經(jīng)PCR擴(kuò)增，電泳結(jié)果示:在位于約IO00bP位置有一明顯的條帶，此片段長(zhǎng)度與ROPZ片段長(zhǎng)度 (1042bP)相當(dāng)，也與pcDNA3.1一ROPZ質(zhì)粒雙酶切鑒定的結(jié)果一致(見(jiàn)圖2)。以上兩結(jié)果均表明:目的基因ROPZ已正確插入到質(zhì)粒PcDNA3.1的EcoRI、Handlll兩酶切位點(diǎn)之間。4.測(cè)序結(jié)果測(cè)序公司測(cè)序分2個(gè)循環(huán):利用質(zhì)粒peDNA3.1的通用引物M13R介48)來(lái)進(jìn)行正向測(cè)序，(見(jiàn)測(cè)序結(jié)果圖1);利用質(zhì)粒pcDNA3.1的通用引物M13F(一47)來(lái)進(jìn)行反向測(cè)序(見(jiàn)測(cè)序結(jié)果圖2)。結(jié)果示:測(cè)序核昔酸序列與文獻(xiàn)報(bào)道的ROPZ基因序列一致，表明我們成功克隆出含ROPZ的基因序列。

B的PCR鑒定B質(zhì)粒經(jīng)PCR擴(kuò)增，電泳結(jié)果示度與CTAZ/B片段長(zhǎng)度(516bp)相果一致(見(jiàn)圖5)。明:目的基因CTAZ/B己正確插入間。粒pcDNA3.1的通用引物M13RC序核普酸序列與文獻(xiàn)報(bào)道的CrA基因序列。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]弓形蟲(chóng)ROP1基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒免疫小鼠后的免疫應(yīng)答[J]. 郭虹,陳觀(guān)今,鄭煥欽,周永安,呂芳麗.  中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志. 1999(06)



本文編號(hào)：3423095