目的運用CRISR/Cas9技術敲除小鼠基因組中Bmp9基因片段,構建Bmp9基因敲除小鼠。方法根據(jù)Bmp9基因的外顯子序列,設計一段sgRNA并合成。sgRNA體外轉錄后和Cas9 mRNA混合后顯微注射受精卵細胞,注射后的受精卵細胞移植至受體動物獲得子代小鼠。提取子代小鼠基因組DNA測序鑒定其基因型。基因型鑒定正確的小鼠與野生型交配后篩選純合子小鼠。同時取純合子小鼠心臟、肝、脾、肺、腎,勻漿后提取總RNA和總蛋白,通過q PCR、WB和免疫組化檢測BMP9在各組織中的表達。結果設計并合成20 bp的sgRNA并進行體外轉錄,顯微注射并回植后得到基因突變小鼠,連續(xù)交配后得F2代純合子。測序結果顯示,突變小鼠存在兩種基因型,一種為5 bp缺失突變,另一種為13 bp缺失并伴有1 bp插入突變。與野生型C57BL/6相比,q PCR、WB和免疫組化結果均表明基因敲除小鼠肝中BMP9表達顯著降低。結論利用CRISPR/Cas9技術成功構建出了BMP9基因敲除小鼠。 

【文章來源】：中國實驗動物學報. 2019,27(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 試劑與儀器
    1.2 方法
        1.2.1 sgRNA重組質(zhì)粒的構建
        1.2.2 體外轉錄
        1.2.3 顯微注射及胚胎移植
        1.2.4 基因型鑒定和純合子的篩選
        1.2.5 BMP9在肝組織中的表達
2 結果
    2.1 構建質(zhì)粒及體外轉錄
    2.2 基因型鑒定
    2.3 BMP9在敲除小鼠肝組織中的表達
        2.3.1 BMP9 mRNA和蛋白在敲除小鼠中的表達
        2.3.2 免疫組化
3 討論



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