本文關鍵詞：神經(jīng)科學研究中人類腦片培養(yǎng)技術的建立和評價，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：建立和優(yōu)化離體腦組織切片的培養(yǎng)方法，，制備適用于活組織電生理學研究的人類腦片標本。 方法：（1）建立穩(wěn)定的Wistar幼鼠腦片體外培養(yǎng)方法：優(yōu)化嚙齒類腦片培養(yǎng)技術，在切片和培養(yǎng)記錄過程中使用不同成分的改良人工腦脊液（artificial cerebrospinal fluid，ACSF），采用界面下培養(yǎng)-快速層流技術,在48h內(nèi)動態(tài)觀察腦片局域場電位（local field potential，LFP）變化，采用HE染色、氯三苯四唑（triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色、尼氏染色動態(tài)觀察腦片組織病理學變化。（2）人類腦片體外培養(yǎng)方法：在優(yōu)化嚙齒類腦片培養(yǎng)方法的基礎上，采用神經(jīng)外科深部腦腫瘤切除手術過程中，開窗切除的非病理大腦皮層組織迅速進行轉(zhuǎn)運、修塊和進行體外切片培養(yǎng)，并同上過程監(jiān)測腦片LFP和神經(jīng)元組織病理學變化。 結(jié)果：（1）幼鼠和人類腦片LFP電生理信號均可持續(xù)48h以上，但隨著培養(yǎng)時間的延長呈衰減趨勢；（2）HE染色計數(shù)腦片神經(jīng)元死亡率隨時間呈遞增趨勢，人類和幼鼠腦片均可維持50%以上神經(jīng)元存活達24h；（3）TTC染色腦片IOD值隨時間呈遞減趨勢，培養(yǎng)24h后呈衰減趨勢，48h組仍可見紅色區(qū)域，各觀察時間點人類腦片與幼鼠比較未見明顯差異（P0.05）；（4）尼氏染色IOD值隨時間呈遞減趨勢，幼鼠和人類腦片在24h后明顯降低，48h后降至較低水平。 結(jié)論：人類腦片培養(yǎng)存活時間與嚙齒類腦片相似，可以在切片后保存半數(shù)以上的神經(jīng)元存活達24h以上，能夠滿足活細胞神經(jīng)電生理研究要求。采用不同的切片和培養(yǎng)ACSF溶液，聯(lián)合液面下培養(yǎng)-快速層流技術，可以滿足手術切除的人類非病理大腦皮層組織體外切片培養(yǎng)前經(jīng)過1h左右的運輸時間。
【關鍵詞】：人類腦片 電生理學 腦片培養(yǎng)
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R338
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 中英文縮略詞對照表9-10
• 第1章 緒論10-13
• 第2章 綜述13-28
• 2.1 大腦皮質(zhì)解剖結(jié)構(gòu)13-14
• 2.2 神經(jīng)元培養(yǎng)概述14-15
• 2.3 腦片培養(yǎng)方法15-17
• 2.3.1 急性腦片培養(yǎng)15-16
• 2.3.2 器官型腦片培養(yǎng)16-17
• 2.4 腦片培養(yǎng)的影響因素17-24
• 2.4.1 腦片營養(yǎng)成分18-23
• 2.4.2 腦片制備和培養(yǎng)方式23-24
• 2.5 腦片存活質(zhì)量評價24-25
• 2.6 人類腦片培養(yǎng)25-28
• 第3章 材料和方法28-37
• 3.1 主要試劑28
• 3.2 主要儀器28-29
• 3.3 實驗標本29
• 3.4 藥物準備和預處理29-30
• 3.5 標本制備30-31
• 3.6 腦片局域場電位記錄31-32
• 3.7 組織學染色觀察32-35
• 3.7.1 HE 染色原理32-33
• 3.7.2 HE 染色步驟33-34
• 3.7.3 TTC 染色原理34
• 3.7.4 TTC 染色步驟34
• 3.7.5 尼氏染色原理34-35
• 3.7.6 尼氏染色步驟35
• 3.8 統(tǒng)計學分析35-37
• 第4章 結(jié)果37-45
• 4.1 幼鼠和人類腦片電生理信號37-40
• 4.2 組織學指標40-45
• 4.2.1 HE 染色40-42
• 4.2.2 TTC 染色42-43
• 4.2.3 尼氏染色43-45
• 第5章 討論45-50
• 第6章 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-57
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果57-58
• 致謝58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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  本文關鍵詞：神經(jīng)科學研究中人類腦片培養(yǎng)技術的建立和評價，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：340216