背景:昆明小鼠胚胎成纖維細(xì)胞是目前最常用的飼養(yǎng)層細(xì)胞,C57BL/6小鼠胚胎成纖維細(xì)胞作為飼養(yǎng)層的研究鮮有報(bào)道。目的:體外分離和培養(yǎng)C57BL/6小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,制備飼養(yǎng)層,力求擴(kuò)大小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的來源。方法:用不同濃度胰蛋白酶分步消化法體外分離和培養(yǎng)C57BL/6小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,觀察其生物學(xué)特性,研究其生長規(guī)律,并制備小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層,檢測干細(xì)胞在所制備飼養(yǎng)層上的生長狀態(tài)。結(jié)果與結(jié)論:不同濃度胰蛋白酶分步消化法制備的C57BL/6小鼠胚胎成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)好,獲得的成纖維細(xì)胞數(shù)量多,增殖活躍。在細(xì)胞凍存后1,2周、1,3,6個(gè)月內(nèi)復(fù)蘇的細(xì)胞存活率差異無顯著性意義。C57BL/6小鼠胚胎成纖維細(xì)胞在第2-5代增殖旺盛,第6代以后細(xì)胞增殖出現(xiàn)明顯下降。種植到培養(yǎng)皿上的C57BL/6小鼠飼養(yǎng)層細(xì)胞在種植后3 d內(nèi)活力高,種植4 d以后細(xì)胞活力急劇下降。所以C57BL/6小鼠胚胎成纖維細(xì)胞來源的飼養(yǎng)層的最佳使用時(shí)間為滅活后3 d內(nèi),C57BL/6小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層和昆明小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層一樣,能很好地支持胚胎干細(xì)胞及誘導(dǎo)多能干細(xì)胞生長。 

【文章來源】：中國組織工程研究. 2014,18(11)CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
文章亮點(diǎn):
0 引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    設(shè)計(jì):
    時(shí)間及地點(diǎn):
    材料:
        實(shí)驗(yàn)動物:
        人胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞來源:
    實(shí)驗(yàn)方法:
        原代成纖維細(xì)胞分離與培養(yǎng):
        成纖維細(xì)胞凍存:
        成纖維細(xì)胞復(fù)蘇及存活率測定:
        EdU標(biāo)記法檢測細(xì)胞增殖情況:
        成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層的制備:
        MTT法檢測成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層活力:
    主要觀察指標(biāo):
    統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:
2 結(jié)果Results
    2.1原代和傳代后的成纖維細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
    2.2復(fù)蘇后的成纖維細(xì)胞存活率
    2.3 EdU檢測成纖維細(xì)胞增殖變化
    2.4培養(yǎng)天數(shù)對成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層質(zhì)量的影響
    2.5人胚胎干細(xì)胞和人誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞在不同品系成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上生長狀況
3 討論Discussion
作者貢獻(xiàn):
利益沖突:
倫理要求:
學(xué)術(shù)術(shù)語:
作者聲明:



本文編號：3398094