目的 探討臍血來(lái)源造血干細(xì)胞植入NOD／SCID小鼠所需條件，建立hu-SRC-NOD／SCID模型并檢測(cè)植入后嵌和體內(nèi)重建造血和免疫的水平，以期為今后應(yīng)用該模型發(fā)展疫苗、藥物等相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。 方法 分離分選臍血MNC、CD34⁺細(xì)胞，通過(guò)尾靜脈分別移植各組經(jīng)照射(⁶⁰Co，300cGy)或未照射的NOD／SCID小鼠。移植4～10周后流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)小鼠外周血、骨髓、胸腺人CD45、CD19、CD3抗原的表達(dá)；移植6周后提取部分小鼠骨髓、胸腺RNA，RT-PCR擴(kuò)增人TCR Vβ亞家族基因，并用基因掃描進(jìn)行T細(xì)胞克隆性分析；10周后RT-PCR檢測(cè)外周血、骨髓人MHC-β₂ m及Rag2基因表達(dá)：NOD／SCID小鼠PBMNC及胸腺、骨髓、脾細(xì)胞反復(fù)凍融處理去除免疫反應(yīng)性和增殖能力后與臍血MNC共培養(yǎng)2～3周經(jīng)RT-PCR和基因掃描分析臍血T細(xì)胞克隆性。 結(jié)果 經(jīng)免疫磁珠分選可獲得足量CD34⁺細(xì)胞，純度80～95％；NOD／SCID小鼠照射后移植臍血CD34<... 

【文章來(lái)源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

免疫磁珠分選前后CD34+細(xì)胞純度變化

CD3抗原表達(dá)，A組僅有1只植入，且只表達(dá)CD45、CD19。表達(dá)分布見(jiàn)表2。移植后，各組植入小鼠外周血細(xì)胞CD45+表達(dá)水平于6一8達(dá)到高峰，各時(shí)點(diǎn)CD45+、CD45+CD19+、CD45+CD3+細(xì)胞表達(dá)水平見(jiàn)表3一5，及圖3~5。表3:移植后鼠外周血表達(dá)人源CD45+細(xì)胞水平(%)各組CD45+細(xì)胞表達(dá)水平(%)時(shí)l司(周 )ABCDEF43.57.6士0.67.1士0.66.0士0.4一一63.97.9士0.68.1士0.66.1士0.5一一83.49.1士 0.85.3士0.3一一 102.17.7士 1.03.1士0.3一一口未照射移植CD34+細(xì)胞組(A).移植CD34+細(xì)胞組(B+C).移植姍吸:組(D)︵%︶如以理異的哪干Ke 4weeks6weeks8.eeks10weeks圖3:移植后鼠外周血表達(dá)人源CD45+細(xì)胞水平

R檢測(cè)人MHC一BZm基因及ra歇基因HC-I類分子由重鏈(a鏈)和BZm(編碼基因在15號(hào)染細(xì)胞表面。提取B組小鼠外周血、骨髓RNA，經(jīng)Rl’-Pm(144bp)，表明小鼠獲得植入。為進(jìn)一步證明小鼠獲得取人ra歇基因?yàn)闄z測(cè)標(biāo)志。重組激活蛋白R(shí)AGZ同RA異性因子，為淋巴細(xì)胞發(fā)育和V(D)J重組所必需，編色體上。在B組小鼠骨髓中，檢測(cè)到人RagZ基因片斷

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]應(yīng)用TCR Vβ基因譜分析血液病與免疫性疾病的T細(xì)胞克隆性[J]. 李揚(yáng)秋.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 1999(03)
[2]利用基因掃描分析TCR Vβ亞家族的CDR3長(zhǎng)度方法檢測(cè)T細(xì)胞克隆性[J]. 李揚(yáng)秋,汪明春,吳幼華.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 1998(01)



本文編號(hào)：3398088