【目的】Luciferase2/mKate2雙報(bào)告基因標(biāo)記小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mMSC）,并進(jìn)行活體生物發(fā)光和熒光雙模態(tài)光學(xué)成像研究�！痉椒ā咳撬杓�(xì)胞貼壁分離法提取mMSC,進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)志物和多向分化潛能的鑒定;CMVLuciferase2-mKate2慢病毒感染mMSC,根據(jù)細(xì)胞內(nèi)遠(yuǎn)紅熒光蛋白mKate2的表達(dá)水平評(píng)估轉(zhuǎn)染效率并利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行純化篩選;對(duì)篩選后的mMSC（mMSC-CMV-Luc2-mKate2,mKate2+>95%）進(jìn)行活體生物發(fā)光和熒光雙模態(tài)光學(xué)成像�！窘Y(jié)果】成功分離mMSC;表型分析結(jié)果顯示mMSC高表達(dá)Sca-1（94.5%）、CD44（99.6%）,低表達(dá)CD11b（0.092%）、CD45（0.11%）;mMSC具有成脂和成骨分化能力。CMV-Luciferase2-mKate2慢病毒感染mMSC 96 h后,細(xì)胞內(nèi)mKate2的熒光表達(dá)率為22.97%,經(jīng)流式細(xì)胞儀篩選后mKate2表達(dá)率大于95%。對(duì)篩選后的mMSC進(jìn)行活體生物發(fā)光成像和熒光成像可探測(cè)光信號(hào),光信號(hào)強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)量呈明顯線性正相關(guān)（生物發(fā)光成像為R2=0.9893;熒光... 

【文章來源】：中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版). 2014,35(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)、細(xì)胞表型分析和分化潛能鑒定
        1.1.1 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)
        1.1.2 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表型分析
        1.1.3 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分化潛能鑒定
    1.2 CMV-Luciferase2-m Kate2對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)記
        1.2.1 慢病毒包裝
        1.2.2 慢病毒活性滴度測(cè)定
        1.2.3 CMV-Luciferase2-m Kate2慢病毒感染小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
    1.3 活體光學(xué)成像
    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 m MSC的形態(tài)及鑒定
    2.2 慢病毒在293FT細(xì)胞的包裝及滴度測(cè)定
    2.3 CMV-luciferase2-m Kate2對(duì)m MSC的標(biāo)記及流式篩選
    2.4 m MSC-CMV-Luc2-m Kate2的光學(xué)成像
3 討論



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