目的建立轉(zhuǎn)錄因子碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（ChREBP）的條件性基因敲除小鼠模型,為研究ChREBP的體內(nèi)生物學(xué)功能提供技術(shù)手段。方法和結(jié)果利用Cre/loxP基因打靶策略,通過(guò)構(gòu)建基因打靶載體和基于胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）的基因同源重組,在ChREBP基因第8外顯子的兩側(cè)分別引入loxP位點(diǎn);將打靶成功的ES細(xì)胞顯微注射至小鼠囊胚,然后植入假孕雌鼠子宮獲得嵌合鼠,進(jìn)一步獲得可種系傳代的ChREBP?ox/+小鼠;將ChREBP?ox/+小鼠與Alb-Cre小鼠交配,獲得ChREBP的肝臟特異性基因敲除小鼠。結(jié)論建立了ChREBP條件性基因敲除小鼠模型,為揭示不同組織中ChREBP的生理功能和病理學(xué)意義提供了重要手段。 

【文章來(lái)源】：第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019,40(02)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 主要材料
        1.1.1 質(zhì)粒、菌株與動(dòng)物
        1.1.2 試劑
    1.2 ChREBP打靶載體的構(gòu)建
        1.2.1 敲除外顯子的選擇
        1.2.2 預(yù)打靶載體的構(gòu)建
        1.2.3 loxP-neo-loxP片段的插入
        1.2.4 Frt-neo-Frt片段的插入
    1.3 ES細(xì)胞的基因打靶與篩選
        1.3.1 ES細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.2 ES細(xì)胞電穿孔DNA轉(zhuǎn)染
        1.3.3 正負(fù)藥物篩選
        1.3.4 雙抗性細(xì)胞克隆的挑取與培養(yǎng)
        1.3.5 ES細(xì)胞同源重組克隆的PCR鑒定
        1.3.6 ES細(xì)胞的囊胚注射及胚胎移植
    1.4 條件敲除小鼠的繁育與鑒定
        1.4.1 首建鼠的繁育及neo基因去除
        1.4.2 條件敲除小鼠構(gòu)建
        1.4.3 小鼠基因型鑒定
        1.4.4 小鼠肝臟ChREBP敲除鑒定
2 結(jié)果
    2.1 ChREBP打靶載體的構(gòu)建及鑒定
    2.2 ES細(xì)胞的基因打靶與同源重組鑒定
    2.3 首建鼠的獲得與繁育
    2.4 條件敲除小鼠的建立
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用細(xì)菌內(nèi)同源重組技術(shù)構(gòu)建胰島β細(xì)胞特異性表達(dá)Cre重組酶的基因敲入打靶載體[J]. 李玲,國(guó)蓉,常緒生,印慨,張曄,劉志民,章衛(wèi)平.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(02)
[2]轉(zhuǎn)錄因子碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白對(duì)肝臟糖脂代謝的調(diào)節(jié)作用[J]. 周露婷,章衛(wèi)平.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(03)



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