趨化因子MIP-2y是本實驗室于2000年從人樹突狀細胞cDNA文庫中通過大規(guī)模隨機測序而獨立發(fā)現(xiàn)的一個屬于CXC家族的新型趨化因子（BRAK為另一個研究小組給以的命名,CXCL14為國際專門命名委員會給以的統(tǒng)一名稱,下文將一律使用CXCL14這一名稱）。研究表明CXCL14對中性粒細胞具有強力的趨化作用,對樹突狀細胞具有較弱的趨化作用,而對單核細胞、NK細胞、T和B淋巴細胞不具有趨化作用。該趨化因子在大多數(shù)正常組織中呈組成型表達,而在大多數(shù)腫瘤細胞系中未能檢測到。目前關于該趨化因子在體內(nèi)的具體生理作用還不清楚,這主要是由于迄今為止該趨化因子的受體還未被克隆出來。 趨化因子受體屬于七次跨膜的G蛋白耦聯(lián)受體（GPCR）超家族,而GPCR是當前臨床用藥最主要的靶點。目前還有約150個所謂孤兒GPCR的天然配體及功能未知,國際上有多家實驗室和許多生物及制藥公司一直致力于破解（deorphanize）這些孤兒GPCR,包括尋找CXCL14受體,這一方面對于深入研究CXCL14的功能是必需的,同時也具有極大的臨床開發(fā)前景,可至今還未克隆成功。本研究也是想通過不同的策略和技術路線來克隆CXC... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

SD-sPS(lE分析CXCL14一GST融合蛋白的表達及純化

SDS一PSGE分析GST蛋白的表達及純化

圖7.G蛋白禍聯(lián)受體的結構特征48R四er7.歇川eutar一ehaareteristicsorGpmtein·coup一“erceptosr.48GProtein一couPledreeePtosrhvaehePthaeliacldomains.AnlinotemriniaerextraecllularsPacenadachtoxytemriniarePersentnitheintraeellularconsevredocmmollmotisfineachTMofllwo:TMI，GNorGxUxxDxxxxxxx()P:TM111，Sxxx伙xhxDE/RY;TM，VYWxxxxxxxxFxxPoxxxxx;YTMVl，F(xiàn)xxCxxP;andTMVll，伙xxxxxxN心PoY.分析其可能的原因有如下幾條。首先，在大腸桿菌中進行的原核表達融合蛋白有可能折疊不完全正確，因此與其受體結合時的親和力太低甚至性。其二，靶細胞選擇不恰當或靶細胞數(shù)量不夠，有可能KG一1細胞CXCL14受體，之所以選擇該細胞是根據(jù)以前的生長實驗結果;另外我們量為3xl護，而文獻報道有多至109細胞的。其三，還有可能是檢測方法無法檢測出微量的受體蛋白，甚至用銀染也未見預期的蛋白條帶，因此文性氨基酸進行代謝標記然后用放射性自顯影來檢測。此外結合緩沖液的組。


本文編號：3378096