背景:成骨細(xì)胞的提取分離尚無(wú)公認(rèn)的高效簡(jiǎn)便的實(shí)驗(yàn)方法。目的:探討用改良酶消化法體外分離、培養(yǎng)并鑒定新西蘭幼兔顱蓋骨成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。方法:實(shí)驗(yàn)利用成纖維細(xì)胞胰酶消化時(shí)脫壁早,終止消化后貼壁快的特點(diǎn),采用改良酶消化法分離3 d齡新西蘭幼兔顱蓋骨成骨細(xì)胞并用差速貼壁法純化培養(yǎng)。倒置顯微鏡每日觀察細(xì)胞形態(tài)及其生長(zhǎng)狀況,采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,測(cè)定堿性磷酸酶含量,免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)Ⅰ型膠原、骨鈣素,Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runt related transcription factor 2,RUNX2）表達(dá),茜素紅染色礦化結(jié)節(jié)等對(duì)成骨細(xì)胞及其生物化學(xué)特性進(jìn)行鑒定。結(jié)果與結(jié)論:（1）成功分離提取并差速貼壁法純化培養(yǎng)成骨細(xì)胞;（2）分離培養(yǎng)的成骨細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),顯示正常的成骨細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)特征;細(xì)胞增殖能力良好;（3）細(xì)胞堿性磷酸酶、Ⅰ型膠原、骨鈣素、RUNX2染色均陽(yáng)性,常規(guī)培養(yǎng)21d茜素紅染色形成礦化結(jié)節(jié);（4）結(jié)果證實(shí),改良酶消化法培養(yǎng)出的成骨細(xì)胞具有典型的成骨細(xì)胞特征,成分單一,存活率高。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)組織工程研究. 2019,23(07)北大核心

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【部分圖文】：

成骨細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)染色成骨相關(guān)蛋白表達(dá)(A，B：×100，C：×200)

4Alkalinephosphataseactivityofpassage3osteoblasts圖注：圖A為Ⅰ型膠原表達(dá)；B為骨鈣素表達(dá)；C：RUNX2表達(dá)。圖5成骨細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)染色成骨相關(guān)蛋白表達(dá)(A，B：×100，C：×200)Figure5Expressionofosteogenesis-relatedproteinsinosteoblastsdetectedbyimmunohistochemicalstaining(A,B,×100,C,×200)圖注：細(xì)胞排列呈以礦化結(jié)節(jié)為中心的“火山口”樣、旋渦狀排列。0.450.400.350.300.250.200.150.100.050吸光度值1357911培養(yǎng)時(shí)間(d)圖6成骨細(xì)胞茜素紅染色結(jié)果(×200)Figure6Alizarinredstainingofosteoblasts(×200)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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