人巨細(xì)胞病毒（HCMV）是人類重要的病原體之一，孕婦初次感染HCMV，可導(dǎo)致胎兒畸形或流產(chǎn)，HCMV的活動(dòng)性感染可以危及免疫抑制患者的生命。鑒于感染患者常常無(wú)癥狀或缺乏特異性癥狀，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)具有極其重要的意義。 HCMV感染的檢測(cè)方法包括病毒分離培養(yǎng)、抗原檢測(cè)、核酸測(cè)定和血清學(xué)試驗(yàn)，上述方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。HCMV原發(fā)感染的診斷，主要采用血清學(xué)方法，HCMV-IgM型抗體是病毒抗原刺激機(jī)體最早出現(xiàn)的抗體，可作為活動(dòng)性HCMV感染的一個(gè)重要指標(biāo)。用于診斷HCMV-IgM的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）最為常用，具有操作簡(jiǎn)便、快速和設(shè)備要求低的特點(diǎn)，但來(lái)源于病毒的抗原存在著敏感性、特異性和標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題，基因重組獲得表達(dá)產(chǎn)物的技術(shù)正引起各國(guó)學(xué)者重視，國(guó)內(nèi)這方面的研究報(bào)道不多。 目前已知為數(shù)不多的幾種HCMV蛋白具有免疫活性，其中g(shù)p52和pp150是抗原性較強(qiáng)的兩種，能特異性識(shí)別IgM抗體。故而，本研究選擇HCMV gp52和pp150的抗原性、特異性好的C端部分氨基酸的基因片段做目的基因，應(yīng)用基因工程技術(shù)，得到了高效表達(dá)兩者融合基因的工程菌，并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物的抗原性進(jìn)行了研究。研究包... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

gP52基因的PcR擴(kuò)增結(jié)果

100一一512bP圖1一2gP52基因的PcR擴(kuò)增結(jié)果M.相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)DL200O;1一3.PCR擴(kuò)增的gp52基因片段2重組質(zhì)粒T一gp52的構(gòu)建和鑒定將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物回收純化后，與pGEM一T克隆載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌OHS。，在含氨節(jié)青霉素、工PTG和X一gal的LB平板上，挑選白斑進(jìn)行菌落PCR鑒定，得到正確克隆的基因片段(圖1一3)。重組質(zhì)粒T一gp52用EcoRI、sa了I分別酶切后，產(chǎn)生了512bp的目的基因片段(圖1一4)。3重組質(zhì)粒T一gp52插入gp52基因片段的序列測(cè)定將陽(yáng)性克隆的T一gp52進(jìn)行DNA序列分析，結(jié)果表明克隆基因片段與HCMv標(biāo)準(zhǔn)株AD169株gp52蛋白C端設(shè)計(jì)的基因序列一致

GGAGGAGGCGGCGGTTTGGATCGCAACTCCGGCAATTACTTCAACGACGCGAAAGAGGAGAGCGACAGCGAGGATTCTGTAACGTCAGCTGC圖1一5gp52基因片段的序列測(cè)定結(jié)果3PGEx一gp52重組體的構(gòu)建與鑒定利用Ec解I和施了I分別酶切克隆在pGEM一T載體上的gp52基因，電泳回收目的基因，將其插入同樣酶切的pGEX一SX一3表達(dá)載體上，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌后，利用氨節(jié)青霉素抗性篩選，進(jìn)行菌落PCR鑒定，10個(gè)克隆均擴(kuò)增出了512bp的DNA片段。在這10個(gè)克隆中隨機(jī)挑選兩個(gè)克隆提取重組質(zhì)粒后，進(jìn)行Ec口尸I和sall雙酶切鑒定，均切出了slZbp的DNA片段


本文編號(hào)：3366943