腫瘤的生長(zhǎng)，轉(zhuǎn)移依賴于周圍血管的生成，當(dāng)腫瘤組織生長(zhǎng)到2mm3時(shí)，必須血管供給營(yíng)養(yǎng)才能繼續(xù)生長(zhǎng)，否則腫瘤細(xì)胞會(huì)“餓死”。目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了很多血管生成抑制劑如endostatin, restin ,tumstatin,canstatin, arresten等, 它們都能抑制腫瘤生長(zhǎng)，endostatin在美國(guó)即將上市。其中arresten是最新和研究最少的一個(gè)血管生成抑制肽。Arresten是四型膠原α1鏈的NC端，分子量為26kD,等點(diǎn)電6.4，為229個(gè)氨基酸，Colorado發(fā)現(xiàn)它能抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和新血管的生成。本課題運(yùn)用基因克隆技術(shù)，克隆和表達(dá)了arresten基因。首先用Trizol從漢族人肝臟提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈。 使用軟件RNASTRUCTRUE3.5分析四型膠原的α1鏈的cDNA，發(fā)現(xiàn)arresten基因能形成復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)，嚴(yán)重影響PCR擴(kuò)增時(shí)引物與模板的配對(duì)，故采用巢式PCR擴(kuò)增arresten基因。利用一步法克隆新技術(shù)構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染到大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)。第一部分：一步法克隆新技術(shù)利用T4 DNA Polymerase 的3’-5’的外切活... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

發(fā)現(xiàn)在72小時(shí)時(shí)重組菌表達(dá)的arresten

29re2.2 The layout of the construction of the vector pPIC9-arresten and its integration with pichiagenome2 載體 pPIC9-arresten的構(gòu)建和與畢赤酵母染色體的整合

圖 2.5 SDS-PAGE 分析表達(dá)蛋白Fig.2.5 SDS-PAGE analysis of expressed arresten1. 72h supernatant of GS115 conditioned medium 20ul2. Protein marker (14, 20, 24, 29, 36, 45, 66kD)3. 24h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul4. 36h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul5. 48h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul6. 60h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul7. 72h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul8, 90 h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul9,102h supernatant of GS115-arresten conditioned medium 20ul


本文編號(hào)：3319535