【目的】構(gòu)建在中華按蚊Anopheles sinensis中的電轉(zhuǎn)化顯微注射技術平臺,并利用該技術平臺實現(xiàn)活體基因瞬時過表達對其進行驗證,為開展系統(tǒng)的基因功能研究奠定基礎�！痉椒ā恳訡UY21EDITⅡ電轉(zhuǎn)儀為主體構(gòu)建中華按蚊中的電轉(zhuǎn)化顯微注射技術平臺;使用同源重組法構(gòu)建EGFP和Bm-iAANAT基因的瞬時過表達質(zhì)粒,在中華按蚊化蛹3 h時注射該質(zhì)粒進入蛹體,隨即使用電轉(zhuǎn)儀對注射后的蛹進行電擊,待注射個體發(fā)育至化蛹39 h時,利用體視熒光顯微鏡觀察蛹體表皮著色和發(fā)光情況,并通過熒光定量PCR檢測EGFP和Bm-iAANAT的表達�！窘Y(jié)果】構(gòu)建了用于顯微注射的PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV40和PIZ-modi-Aepub-AANAT-T2A-EGFP-SV40過表達載體。PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV40注射組中華按蚊在化蛹39 h時約87.5%的個體成活并正常黑化,這其中約92.7%的個體的表皮檢測到明顯的綠色熒光,注射無啟動子載體PIZ-modi-EGFP-SV40并進行電擊的陰性對照組和注射過表達載體PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV40但... 

【文章來源】：昆蟲學報. 2019,62(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 蚊蟲品系
    1.2 電轉(zhuǎn)化顯微注射平臺的儀器設備
    1.3 主要試劑與耗材
    1.4 瞬時過表達載體的構(gòu)建
    1.5 顯微注射中華按蚊蛹及電擊操作
    1.6 表型觀察及基因表達分析
    1.7 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 中華按蚊電轉(zhuǎn)化顯微注射技術平臺的建立
    2.2 瞬時過表達載體的構(gòu)建和驗證
    2.3 單報告基因質(zhì)粒在中華按蚊蛹中的表達
    2.4 雙報告基因質(zhì)粒在中華按蚊蛹中的表達
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]蟲媒疾病傳播媒介的研究進展[J]. 王燕紅,鄭愛華,劉起勇,康樂,鄒振.  應用昆蟲學報. 2017 (03)
[2]轉(zhuǎn)基因蚊最新研究進展[J]. 楊頻.  中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2011(02)
[3]家蠶轉(zhuǎn)基因技術中若干因素對轉(zhuǎn)基因效率的影響[J]. 馬三垣,徐漢福,段建平,趙愛春,張美蓉,夏慶友.  昆蟲學報. 2009(06)

博士論文
[1]家蠶安全高效轉(zhuǎn)基因技術體系的研究[D]. 龍定沛.西南大學 2015



本文編號：3281556