角質(zhì)細(xì)胞生長因子（KGF）是成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）家族的成員之一，又稱FGF-7。KGF通過旁分泌方式特異性刺激上皮細(xì)胞的生長、分化、遷移，在治療皮膚創(chuàng)傷、角膜損傷、消化性潰瘍及放化療損傷防護(hù)等方面具有誘人的應(yīng)用前景。但由于其在人體中含量極低，KGF的研究與應(yīng)用受到很大限制，因此利用基因工程方法制備大量、高活性的KGF，成為研究的重點(diǎn)。本文在原有工作的基礎(chǔ)上，對工程菌的誘導(dǎo)表達(dá)條件、產(chǎn)物的純化及生物學(xué)活性進(jìn)行探討，為建立規(guī)�；a(chǎn)KGF的下游技術(shù)提供科學(xué)依據(jù)。 采用分批培養(yǎng)，對工程菌表達(dá)融合蛋白GST-KGF的條件進(jìn)行研究。結(jié)果表明，GST-KGF可溶表達(dá)的最佳條件為：誘導(dǎo)溫度25℃，誘導(dǎo)物IPTG濃度0.3mmol／L，誘導(dǎo)時(shí)菌體密度OD₆₀₀約為0.97，誘導(dǎo)時(shí)間5h。在該誘導(dǎo)條件下，可溶性的融合蛋白GST-KGF表達(dá)量約占菌體總蛋白的4.2％，幾發(fā)酵液可收獲25mg左右的GST-KGF。 針對融合蛋白與還原型谷胱苷肽（GSH）和肝素具有特異性的親和力，我們采用GSH-Sepharose 4B和Heparin-Sepharose CL-6B兩... 

【文章來源】：廈門大學(xué)福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
    1.1 生長因子與創(chuàng)傷修復(fù)
    1.2 KGF的研究進(jìn)展
    1.3 重組人KGF的研究概況
    1.4 本文的研究目的與內(nèi)容
材料與方法
    2.1 材料
    2.2 方法
結(jié)果與分析
    3.1 表達(dá)質(zhì)粒的酶切鑒定
    3.2 融合蛋白GST-KGF的誘導(dǎo)表達(dá)
    3.3 融合蛋白GST-KGF的誘導(dǎo)表達(dá)條件的研究
    3.4 表達(dá)產(chǎn)物的純化
    3.5 表達(dá)產(chǎn)物的免疫學(xué)活性
    3.6 重組人KGF對小鼠角膜上皮細(xì)胞促增殖作用
    3.7 重組人KGF對小鼠燙傷面愈合的促進(jìn)作用
討論
    4.1 融合蛋白質(zhì)GST-KGF的表達(dá)
    4.2 融合蛋白質(zhì)GST-KGF的純化
    4.3 KGF生物學(xué)活性的檢測
結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 今后工作展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3280886