目的：擴(kuò)增重慶麻鴨血清中的鴨乙肝病毒基因組，克隆入測(cè)序質(zhì)粒，測(cè)序后進(jìn)行序列分析，為下一步利用該株病毒進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)藥物篩選打好基礎(chǔ)。方法：從自然感染鴨乙肝病毒（DHBV）的重慶麻鴨血清中提取DHBV DNA，用PCR方法鑒定后再通過(guò)PCR方法擴(kuò)增完整基因組，將擴(kuò)增片段克隆入載體pGEM-T中，經(jīng)過(guò)酶切和PCR鑒定后，進(jìn)行測(cè)序，然后用DNAtool、ClustalX和Phylip軟件分析所得序列。結(jié)果： （1）.用位于S區(qū)的引物擴(kuò)增鴨血清提取物，證實(shí)所得提取物確為DHBV DNA；（2）.用PCR方法擴(kuò)增DHBV DNA，擴(kuò)增出長(zhǎng)度為3.0kb的單一條帶，與預(yù)期相符；（3）.將PCR擴(kuò)增所得片段克隆入PGEM-T載體，經(jīng)酶切和PCR鑒定，證實(shí)該3.0 kb片段已被插入載體中；（4）.重組質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果表明，質(zhì)粒中的插入片段確為DHBV DNA；（5）.測(cè)得序列用相關(guān)軟件分析表明，該株重慶麻鴨乙肝病毒（DHBVcq）基因組全長(zhǎng)3024bp, 至少含有3個(gè)開放讀碼框架，在核酸水平和蛋白質(zhì)水平均存在許多與功能相關(guān)的保守序列，同時(shí)也具有<WP=7>不同于其它大多數(shù)DHBV的特點(diǎn)。進(jìn)化分析... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

快速法初篩重組質(zhì)粒Fig1-6Preliminaryscreenofrecombinantplasmidswithrapidextraction.

蛋白 該 ORF 并不以 AUG 為起始密碼 而可能是以 TTG ATT或 在 DHBVcq 的 2292 2636nt 內(nèi)也存在類似讀碼框架 S.F Cha相應(yīng)長(zhǎng)度的 XmRNA 推測(cè) X 蛋白可能從更長(zhǎng)的病毒 mRNA 如 Cm XmRNA 量極少而不能以現(xiàn)有方法檢測(cè)增強(qiáng)子位于 DHBV2172-2351nt 多種核因子可結(jié)合于該區(qū)[3]GCAAT 出現(xiàn)在 DHBVcq2189-2193nt HNF1 結(jié)合順序 AGTTAATGA3-2297nt,HNF3結(jié)合順序TGTTTGC位于2220-2226nt,2326-2332n圖 1-11 DHBV基因結(jié)構(gòu)圖Fig.1-11 Gene organization of DHBVcq and location of regulation elements. PreS gene promoter. S-P, S gene promoter. P-P, PgRNA promoter. , pgRregion. ENH, enhancer. C/EBP, CCAAT/enhancer binding protein. Hheatocyte nuclear factor 3. HNF1, hepatocyte nuclear factor 1.

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生論已報(bào)道的 DHBV 株都很保守 DH件將 DHBVcq 及 GenBank 中公布lip 軟件構(gòu)建進(jìn)化樹 應(yīng)用的評(píng)估 從進(jìn)化樹可以看出 DHB


本文編號(hào)：3278255