目的：擴增重慶麻鴨血清中的鴨乙肝病毒基因組，克隆入測序質(zhì)粒，測序后進行序列分析，為下一步利用該株病毒進行動物體內(nèi)藥物篩選打好基礎。方法：從自然感染鴨乙肝病毒（DHBV）的重慶麻鴨血清中提取DHBV DNA，用PCR方法鑒定后再通過PCR方法擴增完整基因組，將擴增片段克隆入載體pGEM-T中，經(jīng)過酶切和PCR鑒定后，進行測序，然后用DNAtool、ClustalX和Phylip軟件分析所得序列。結果： （1）.用位于S區(qū)的引物擴增鴨血清提取物，證實所得提取物確為DHBV DNA；（2）.用PCR方法擴增DHBV DNA，擴增出長度為3.0kb的單一條帶，與預期相符；（3）.將PCR擴增所得片段克隆入PGEM-T載體，經(jīng)酶切和PCR鑒定，證實該3.0 kb片段已被插入載體中；（4）.重組質(zhì)粒測序結果表明，質(zhì)粒中的插入片段確為DHBV DNA；（5）.測得序列用相關軟件分析表明，該株重慶麻鴨乙肝病毒（DHBVcq）基因組全長3024bp, 至少含有3個開放讀碼框架，在核酸水平和蛋白質(zhì)水平均存在許多與功能相關的保守序列，同時也具有<WP=7>不同于其它大多數(shù)DHBV的特點。進化分析... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

快速法初篩重組質(zhì)粒Fig1-6Preliminaryscreenofrecombinantplasmidswithrapidextraction.

蛋白 該 ORF 并不以 AUG 為起始密碼 而可能是以 TTG ATT或 在 DHBVcq 的 2292 2636nt 內(nèi)也存在類似讀碼框架 S.F Cha相應長度的 XmRNA 推測 X 蛋白可能從更長的病毒 mRNA 如 Cm XmRNA 量極少而不能以現(xiàn)有方法檢測增強子位于 DHBV2172-2351nt 多種核因子可結合于該區(qū)[3]GCAAT 出現(xiàn)在 DHBVcq2189-2193nt HNF1 結合順序 AGTTAATGA3-2297nt,HNF3結合順序TGTTTGC位于2220-2226nt,2326-2332n圖 1-11 DHBV基因結構圖Fig.1-11 Gene organization of DHBVcq and location of regulation elements. PreS gene promoter. S-P, S gene promoter. P-P, PgRNA promoter. , pgRregion. ENH, enhancer. C/EBP, CCAAT/enhancer binding protein. Hheatocyte nuclear factor 3. HNF1, hepatocyte nuclear factor 1.

重慶醫(yī)科大學碩士研究生論已報道的 DHBV 株都很保守 DH件將 DHBVcq 及 GenBank 中公布lip 軟件構建進化樹 應用的評估 從進化樹可以看出 DHB


本文編號：3278255