目的:探討不同靈長類動物限制因子不育-α-基序結(jié)構(gòu)域和組氨酸/天冬氨酸殘基雙聯(lián)體結(jié)構(gòu)域包涵蛋白1 （SAMHD1）的抗病毒、抑制逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子LINE-1和減弱干擾素（IFN）產(chǎn)生信號通路等作用,為靈長類動物SAMHD1的研究提供依據(jù)。方法:構(gòu)建穩(wěn)定表達不同靈長類動物SAMHD1蛋白的U937細胞系,以空載體構(gòu)建的細胞作為陰性對照組,以穩(wěn)定表達不同靈長類動物SAMHD1蛋白的U937細胞系為實驗組。經(jīng)佛波酯（PMA）刺激分化成巨噬樣細胞后,流式細胞術(shù)分析各組HIV-1病毒感染率。以單獨轉(zhuǎn)染SAMHD1表達質(zhì)粒的HEK293T細胞為對照組,共同轉(zhuǎn)染SAMHD1與HIV-2/SIV Vpx表達質(zhì)粒的細胞為實驗組,轉(zhuǎn)染后48h收獲細胞,采用Western blotting法檢測SAMHD1蛋白表達水平,免疫熒光檢測法觀察不同SAMHD1蛋白的細胞內(nèi)定位。以單獨轉(zhuǎn)染LINE-1-GFP報告質(zhì)粒的HEK293T細胞作為對照組,以共同轉(zhuǎn)染LINE-1-GFP與SAMHD1表達質(zhì)粒的細胞為實驗組,采用流式細胞術(shù)檢測GFP陽性細胞率,代表SAMHD1對LINE-1轉(zhuǎn)座子的活性。以單獨轉(zhuǎn)染IFN-luc報... 

【文章來源】：吉林大學學報(醫(yī)學版). 2019,45(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞、質(zhì)粒和主要試劑
    1.2 細胞培養(yǎng)
    1.3 SAMHD1穩(wěn)定表達細胞系的建立和抗病毒實驗
    1.4 Western blotting法檢測病毒蛋白Vpx誘導靈長類動物限制因子SAMHD1降解
    1.5 靈長類動物SAMHD1蛋白的細胞內(nèi)定位
    1.6 流式細胞術(shù)檢測靈長類動物SAMHD蛋白對LINE-1轉(zhuǎn)座子的活性
    1.7 化學發(fā)光儀檢測HEK293T細胞中熒光素酶活性
    1.8 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 靈長類動物HIV-1病毒感染率
    2.2 靈長類動物SAMHD1被病毒蛋白Vpx誘導降解后蛋白表達水平
    2.3 靈長類動物細胞中SAMHD1蛋白的定位
    2.4 各種靈長類動物SAMHD1對LINE-1轉(zhuǎn)座子的活性
    2.5 各組HEK293T細胞中熒光素酶活性
3 討論



本文編號：3255586