目的:探討不同靈長類動物限制因子不育-α-基序結(jié)構(gòu)域和組氨酸/天冬氨酸殘基雙聯(lián)體結(jié)構(gòu)域包涵蛋白1 （SAMHD1）的抗病毒、抑制逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子LINE-1和減弱干擾素（IFN）產(chǎn)生信號通路等作用,為靈長類動物SAMHD1的研究提供依據(jù)。方法:構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)不同靈長類動物SAMHD1蛋白的U937細(xì)胞系,以空載體構(gòu)建的細(xì)胞作為陰性對照組,以穩(wěn)定表達(dá)不同靈長類動物SAMHD1蛋白的U937細(xì)胞系為實(shí)驗(yàn)組。經(jīng)佛波酯（PMA）刺激分化成巨噬樣細(xì)胞后,流式細(xì)胞術(shù)分析各組HIV-1病毒感染率。以單獨(dú)轉(zhuǎn)染SAMHD1表達(dá)質(zhì)粒的HEK293T細(xì)胞為對照組,共同轉(zhuǎn)染SAMHD1與HIV-2/SIV Vpx表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,轉(zhuǎn)染后48h收獲細(xì)胞,采用Western blotting法檢測SAMHD1蛋白表達(dá)水平,免疫熒光檢測法觀察不同SAMHD1蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位。以單獨(dú)轉(zhuǎn)染LINE-1-GFP報(bào)告質(zhì)粒的HEK293T細(xì)胞作為對照組,以共同轉(zhuǎn)染LINE-1-GFP與SAMHD1表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測GFP陽性細(xì)胞率,代表SAMHD1對LINE-1轉(zhuǎn)座子的活性。以單獨(dú)轉(zhuǎn)染IFN-luc報(bào)... 

【文章來源】：吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2019,45(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞、質(zhì)粒和主要試劑
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 SAMHD1穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的建立和抗病毒實(shí)驗(yàn)
    1.4 Western blotting法檢測病毒蛋白Vpx誘導(dǎo)靈長類動物限制因子SAMHD1降解
    1.5 靈長類動物SAMHD1蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位
    1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測靈長類動物SAMHD蛋白對LINE-1轉(zhuǎn)座子的活性
    1.7 化學(xué)發(fā)光儀檢測HEK293T細(xì)胞中熒光素酶活性
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 靈長類動物HIV-1病毒感染率
    2.2 靈長類動物SAMHD1被病毒蛋白Vpx誘導(dǎo)降解后蛋白表達(dá)水平
    2.3 靈長類動物細(xì)胞中SAMHD1蛋白的定位
    2.4 各種靈長類動物SAMHD1對LINE-1轉(zhuǎn)座子的活性
    2.5 各組HEK293T細(xì)胞中熒光素酶活性
3 討論



本文編號：3255586