背景:研究發(fā)現(xiàn)miR-20在促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以及炎癥牙周膜干細(xì)胞的成骨分化中具有重要意義,但其在牙髓干細(xì)胞向神經(jīng)元細(xì)胞分化中的調(diào)節(jié)功能尚未完全闡明。目的:探討miR-20調(diào)控骨形態(tài)發(fā)生蛋白信號通路誘導(dǎo)人乳牙牙髓干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞定向分化的機(jī)制。方法:從人脫落乳牙中分離純化乳牙牙髓干細(xì)胞并進(jìn)行神經(jīng)誘導(dǎo)分化,觀察誘導(dǎo)分化期間細(xì)胞形態(tài)變化,檢測Nestin、NSE、miR-20、BMP2的表達(dá)。將乳牙牙髓干細(xì)胞分為如下5組:陰性對照組（轉(zhuǎn)染陰性對照序列）、miR-20 mimic組（轉(zhuǎn)染mi R-20模擬物48 h）、mi R-20 inhibitor組（轉(zhuǎn)染miR-20抑制物48 h）、通路抑制劑組（骨形態(tài)發(fā)生蛋白通路抑制劑處理細(xì)胞10 d）、聯(lián)合組（轉(zhuǎn)染mi R-20模擬物并且在轉(zhuǎn)染后24 h在培養(yǎng)基中添加通路抑制劑處理細(xì)胞10 d）。各組乳牙牙髓干細(xì)胞在神經(jīng)誘導(dǎo)分化第12天,采用Real-time PCR和Western blot檢測BMP2、BMPR2、Nestin和NSE的m RNA和蛋白水平,免疫熒光染色觀察Ⅲβ-tubulin的表達(dá),高爾基染色檢測神經(jīng)元細(xì)胞樹突棘數(shù)目。結(jié)... 

【文章來源】：中國組織工程研究. 2019,23(21)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

人乳牙牙髓干細(xì)Figure2miR-20andstemcellsfromhuman0d3d6d9d12dGAPDH

7):1662-1676.[26]JinJ,TilveS,HuangZ,etal.Effectofchondroitinsulfateproteoglycansonneuronalcelladhesion,spreadingandneuritegrowthinculture.NeuralRegenRes.2018;13(2):289-297.[27]XuL,LongJ,ShiC,etal.Effectofleukocyteinhibitoryfactoronneurondifferentiationfromhumaninducedpluripotentstemcell-derivedneuralprecursorcells.IntJMolMed.2018;41(4):2037-2049.圖注：圖中A為Ⅲβ-tubulin免疫熒光圖(×200)；B為Ⅲβ-tubulin熒光相對強(qiáng)度。與陰性對照組相比，aP<0.05。圖4各組人乳牙牙髓干細(xì)胞在誘導(dǎo)分化第12天Ⅲβ-tubulin蛋白熒光定量Figure4FluorescencequantificationofIIIβ-tubulinproteininstemcellsfromhumanexfoliateddeciduousteethA陰性對照組miR-20mimic組miR-20inhibitor組通路抑制劑組聯(lián)合組543210aaa相對熒光強(qiáng)度B陰性對照組miR2-0mimic組miR-20inhibitor組通路抑制劑組聯(lián)合組圖注：圖中A為高爾基銀染結(jié)果(×400)；B為樹突棘密度統(tǒng)計結(jié)果。與陰性對照組相比，aP<0.05。圖5各組人乳牙牙髓干細(xì)胞誘導(dǎo)分化第12天神經(jīng)元樹突棘密度Figure5Dendriticspinedensityofneuronsdifferentiatedfromstemcellsfromhumanexfoliateddeciduousteethat12daysofinductionA陰性對照組miR-20mimic組miR-20inhibitor組通路抑制劑組聯(lián)合組2.01.51.00.50aa樹突棘密度a(個/μm)B陰性對照組miR2-0mimic組miR-20inhibitor組通路抑制劑組聯(lián)合組a

DengX,YangF,TangXQ,ZhaoY.MicroRNA-20regulatesdirectionaldifferentiationofstemcellsfromhumanexfoliateddeciduousteeth.ZhongguoZuzhiGongchengYanjiu.2019;23(21):3329-3335.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.1761P.O.Box10002,Shenyang110180www.CRTER.org3335[9]HegartySV,SullivanAM,O'KeeffeGW.BMP2andGDF5induceneuronaldifferentiationthroughaSmaddependantpathwayinamodelofhumanmidbraindopaminergicneurons.MolCellNeurosci.2013;56:263-271.[10]白廣超,金宏亮,雷堃,等.BMP-7誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元細(xì)胞分化的初步研究[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2018,53(2):190-195.[11]趙紅斌,甄英麗,田蓉,等.Notch和BMP信號通路介導(dǎo)紅景天苷促進(jìn)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元細(xì)胞定向分化研究[J].中草藥,2016,47(13):2294-2300.[12]SunDG,XinBC,WuD,etal.miR-140-5p-mediatedregulationoftheproliferationanddifferentiationofhumandentalpulpstemcellsoccursthroughthelipopolysaccharide/toll-likereceptor4signalingpathway.EurJOralSci.2017;125(6):419-425.[13]ZhangJF,FuWM,HeML,etal.MiRNA-20apromotesosteogenicdifferentiationofhumanmesenchymalstemcellsbyco-regulatingBMPsignaling.RNABiol.2011;8(5):829-838.[14]楊倩娟,劉文佳,常文悅,等.miR-20a對人炎癥牙周膜干細(xì)胞成骨分化能力的影響[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志,2016,32(2):186-189.[15]楊鑫,李思潔,趙瑋.Wnt信號通路在調(diào)控牙髓干細(xì)胞多向分化及炎癥損傷修復(fù)中的作用[J].國際口腔醫(yī)學(xué)雜志,2018,45(3):286-290.[16

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3240960