發(fā)布時(shí)間：2021-06-21 08:49

　　第一部分選擇性封閉腫瘤STAT3的新型溶瘤腺病毒M3的構(gòu)建目的本實(shí)驗(yàn)室的第一代腺病毒載體（Ad5/dE1/TK）不能復(fù)制,體內(nèi)存在時(shí)間短;第二代腺病毒載體（Ad5/dE1A/6.7K/gp19K）能復(fù)制,有一定的選擇性,病毒裂解腫瘤細(xì)胞釋放的腫瘤抗原可激發(fā)機(jī)體的特異性免役反應(yīng),對(duì)正常細(xì)胞有一定的毒性;針對(duì)以上兩種腺病毒載體缺點(diǎn),本課題構(gòu)建一種具有更高腫瘤特異性的新型溶瘤腺病毒基因治療載體（Ad5/dE1A/ADP）,并將該載體和癌癥治療的一個(gè)理想靶點(diǎn)相結(jié)合-命名為M3,使之具有更高的選擇性復(fù)制能力、病毒擴(kuò)增量大、高效表達(dá)靶基因、有一定程度的免疫逃避能力和對(duì)正常細(xì)胞幾無(wú)毒性的特點(diǎn),具有強(qiáng)大的腫瘤特異性殺傷效應(yīng),為腫瘤的治療提供了一個(gè)強(qiáng)有力的工具。方法應(yīng)用層析技術(shù)獲取腺病毒的TP-DNA,二次PCR技術(shù)對(duì)Ad5基因組E3區(qū)的ADP基因進(jìn)行定點(diǎn)缺失,通過(guò)限制酶消化、連接酶連接、轉(zhuǎn)化、克隆、體外同源重組、鈣磷轉(zhuǎn)染、細(xì)胞病毒內(nèi)包裝、腺病毒單克隆純化等技術(shù)獲得重組腺病毒,通過(guò)PCR擴(kuò)增、測(cè)序技術(shù)對(duì)該重組腺病毒進(jìn)行鑒定。CsCl梯度液超速離心獲得純化的重組腺病毒。結(jié)果成功的獲得了具有高包裝效率的腺病... 

【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：138 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

目前已有多種條件復(fù)制性腺病毒載體用于研究，部分已進(jìn)入Ⅰ-Ⅱ臨床（表1-1）

33圖 1 PCR 產(chǎn)物 1％瓊脂糖凝膠結(jié)果先以引物1和2，引物3和4分別擴(kuò)增片段1及片段2 （22物為模版，行第三輪PCR反應(yīng)獲得E3/ΔADP DNA片段（-E3/ΔADP酶切鑒定及測(cè)序分析結(jié)果：將E3/ΔA粒中后經(jīng)限制酶消化初步鑒定后送測(cè)序確認(rèn)，eBank中提交的Ad5基因組序列完全一致（缺失

34（B）2 pcDNA3.1-E3/ΔADP酶切鑒定及測(cè)序分析結(jié)P經(jīng)限制酶消化后的產(chǎn)物1％的瓊脂糖凝膠電泳。M：NA3.1質(zhì)粒；lane 2：E3/ΔADP反向插入pcDNA3.1質(zhì)/ΔADP。B：pcDNA3.1-E3/ΔADP經(jīng)4次連續(xù)測(cè)序，結(jié)


本文編號(hào)：3240373