本文關(guān)鍵詞：人B7-H4受體及其抗體的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：B7-H4是一種負(fù)性共刺激分子,是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的B7家族的新成員之一。它的作用是通過(guò)抑制T細(xì)胞的增殖、活化和細(xì)胞因子的分泌來(lái)調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。人類(lèi)的B7-H4屬于Ⅰ型跨膜蛋白,與其他B7家族成員相比,其胞外部分有20-30%的氨基酸同源性。人類(lèi)的B7-H4分子定位在人染色體1p11.1,由6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子組成,其m RNA在淋巴和非淋巴組織中呈廣泛性表達(dá),但是由于受到轉(zhuǎn)錄后水平的嚴(yán)格調(diào)控,B7-H4蛋白僅在正常組織中呈現(xiàn)微弱的表達(dá)。最近的研究表明,B7-H4分子在正常人新鮮分離的T、B淋巴細(xì)胞,樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)和單核細(xì)胞表面均不表達(dá),但可以被體外活化刺激因子誘導(dǎo)表達(dá),有報(bào)道稱(chēng)B7-H4分子在乳腺癌、胃癌、腎細(xì)胞癌、卵巢癌、宮頸癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤及腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中呈現(xiàn)異常高表達(dá)。這些證據(jù)都表明,B7-H4的表達(dá)在腫瘤微環(huán)境中對(duì)腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視具有重要作用。迄今為止,與B7-H4相互作用的受體仍未被發(fā)現(xiàn),但是關(guān)于其受體的研究是目前免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)之一,其受體的發(fā)現(xiàn)將會(huì)幫助我們更進(jìn)一步的了解B7-H4與其受體相互作用的機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。本科室利用標(biāo)記有FITC的B7-H4-h Fc融合蛋白進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),在來(lái)源于扁桃體的部分淋巴細(xì)胞上組成性的表達(dá)B7-H4受體,另外在活化T細(xì)胞和肺癌組織、肺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)來(lái)源的T細(xì)胞上也表達(dá)B7-H4受體。本研究旨在通過(guò)B7-H4-h Fc融合蛋白制備親和層析柱,從扁桃體細(xì)胞分離純化B7-H4受體,并對(duì)該受體蛋白進(jìn)行初步的鑒定,隨后利用所獲得的該受體蛋白對(duì)本科室的兩株疑似抗B7-H4受體的單抗進(jìn)行鑒定。【目的】獲得并檢測(cè)B7-H4的受體,利用B7-H4的受體檢測(cè)本科室所制備的疑似抗B7-H4受體的單抗。【方法】通過(guò)B7-H4-h Fc融合蛋白裝柱制備親和層析柱,從扁桃體細(xì)胞分離獲得B7-H4受體蛋白,觀察SDS-PAGE電泳目的條帶位置以及與羊抗人-HRP和羊抗鼠-HRP的反應(yīng)。對(duì)所得的抗B7-H4受體的疑似單抗及B7-H4-h Fc融合蛋白進(jìn)行生物素的標(biāo)記,用酶聯(lián)免疫方法ELISA對(duì)疑似抗B7-H4受體的單抗進(jìn)行檢測(cè)�！窘Y(jié)果】成功制備結(jié)合B7-H4-h Fc的親和層析柱,分離純化的B7-H4受體蛋白進(jìn)行SDS-PAGE并染色后在170k D上方有條帶,ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示該B7-H4受體與羊抗人-HRP、羊抗鼠-HRP有反應(yīng)。以該受體蛋白進(jìn)行包板,用ELISA方法鑒定,顯示單抗10A10與B7-H4受體有陽(yáng)性反應(yīng)�！窘Y(jié)論】成功分離純化獲得B7-H4受體,并利用該受體對(duì)疑似抗B7-H4受體的單抗進(jìn)行了初步鑒定,成功鑒定出一株抗B7-H4受體的抗體,為進(jìn)一步研究B7-H4受體的生物學(xué)功能提供了有效的工具。
【關(guān)鍵詞】：協(xié)同刺激分子 B7-H4 融合蛋白 B7-H4受體 單克隆抗體 ELISA
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 研究背景9-24
• 參考文獻(xiàn)20-24
• 引言24-25
• 1 實(shí)驗(yàn)試劑與材料25-27
• 2 實(shí)驗(yàn)方法27-34
• 3 結(jié)果34-44
• 4 討論44-46
• 總結(jié)與展望46-47
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 研究生期間完成的論文49-50
• 縮略詞表50-52
• 致謝52-53

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 朱森良;孫曉青;;siRNA靶向沉默B7-H4基因?qū)θ饲傲邢侔〥U145細(xì)胞增值和凋亡的影響[J];河南外科學(xué)雜志;2012年06期

2 張羽;陳曾燕;;B7-H4在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及意義[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2013年12期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 周建波;VTCN1基因在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中作用及機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2014年

2 楊文兵;VTCN1基因在神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中作用機(jī)制的研究[D];武漢大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：人B7-H4受體及其抗體的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：323094