發(fā)布時(shí)間：2021-05-23 01:03

　　目的：探討低氧時(shí)淋巴細(xì)胞[Ca²⁺]i變化與淋巴細(xì)胞增殖活化的關(guān)系以及MφNF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活和對(duì)前炎癥因子TNF-α和IL-6的調(diào)控作用。以了解低氧對(duì)免疫細(xì)胞功能的影響及機(jī)制，闡明低氧性炎癥反應(yīng)的機(jī)理。方法：建立淋巴細(xì)胞和Mφ低氧培養(yǎng)模型；ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)液中IL-2、TNF-α和IL-6的分泌水平；MTT法測(cè)定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率；RT-PCR法觀察TNF-α、IL-6和p65轉(zhuǎn)錄水平；熒光分光光度法測(cè)定淋巴細(xì)胞[Ca²⁺]i變化和Mφ內(nèi)ROS水平；Western blotting法檢測(cè)Mφ胞漿內(nèi)IκBα的磷酸化水平和細(xì)胞核內(nèi)NF-κB的激活量。結(jié)果：①急性低氧后淋巴細(xì)胞[Ca²⁺]i下降，同時(shí)IgG、IL-2分泌量和淋巴細(xì)胞增殖率也明顯下降；低氧預(yù)處理后再進(jìn)行急性低氧，發(fā)現(xiàn)上述指標(biāo)都恢復(fù)到與對(duì)照組相近的水平。②低氧后Mφ前炎癥因子TNF-α和IL-6分泌和轉(zhuǎn)錄水平增加，同時(shí)IκBα酪氨酸磷酸化水平、細(xì)胞核內(nèi)NF-κB激活量以及NF-κB P65轉(zhuǎn)錄水平增高。③抗氧化劑NAC可使IκBα酪氨酸磷酸化水平下降，酪... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 低氧及低氧預(yù)處理后淋巴細(xì)胞[Ca~(2+)]i變化與淋巴細(xì)胞增殖活化的關(guān)系
    一、 實(shí)驗(yàn)材料
        1 主要儀器
        2 主要試劑
        3 實(shí)驗(yàn)取材
    二、 實(shí)驗(yàn)方法
        1 淋巴細(xì)胞分離培養(yǎng)
        2 實(shí)驗(yàn)分組
        3 Fura-2／AM熒光分光光度法檢測(cè)[Ca~(2+)]i
        4 ELISA法檢測(cè)IgG
        5 ELISA法檢測(cè)IL-2
        6 MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖率
        7 統(tǒng)計(jì)分析
    三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)濃度檢測(cè)結(jié)果
        2 IgG分泌量檢測(cè)結(jié)果
        3 IL-2分泌量檢測(cè)結(jié)果
        4 淋巴細(xì)胞增殖率檢測(cè)結(jié)果
    四、 討論
    小節(jié)
第二部分 低氧對(duì)Mφ前炎癥因子分泌的影響
    一、 實(shí)驗(yàn)材料
        1 主要儀器
        2 主要試劑
        3 實(shí)驗(yàn)取材
    二、 實(shí)驗(yàn)方法
        1 Mφ分離培養(yǎng)
        2 非特異性酯酶染色法鑒定Mφ
        3 實(shí)驗(yàn)分組
        4 ELISA法檢測(cè)TNF-α
        5 ELISA法檢測(cè)IL-6
        6 Mφ總RNA分離與提取
        7 RNA濃度分析和純度鑒定
        8 甲醛變性電泳鑒定RNA完整性
        9 RT-PCR檢測(cè)TNF-α mRNA和IL-6 mRNA表達(dá)水平
        10 統(tǒng)計(jì)分析
    三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 Mφ培養(yǎng)
        2 Mφ鑒定結(jié)果
        3 不同氧濃度條件下TNF-α和IL-6的分泌量
        4 不同低氧時(shí)間條件下TNF-α和IL-6的分泌量
        5 RNA純度鑒定的結(jié)果
        6 RNA完整性鑒定的結(jié)果
        7 不同氧濃度條件下TNF-α mRNA和IL-6.mRNA的表達(dá)量
        8 不同低氧時(shí)間條件下TNF-α mRNA和IL-6.mRNA的表達(dá)量
    四、 討論
    小節(jié)
第三部分 低氧后Mφ前炎癥因子分泌增加的機(jī)制-NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活
    一、 實(shí)驗(yàn)材料
        1 主要儀器
        2 主要試劑
        3 實(shí)驗(yàn)取材
    二、 實(shí)驗(yàn)方法
        1 Mφ分離培養(yǎng)
        2 實(shí)驗(yàn)分組及檢測(cè)指標(biāo)
        3 熒光分光光度法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平
        4 胞漿蛋白提取方法
        5 細(xì)胞核內(nèi)蛋白提取方法
        6 考馬斯亮藍(lán)蛋白定量法
        7 Western blotting法檢測(cè)IκBα酪氨酸磷酸化水平
        8 Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)NF-κB激活量
        9 RT-PCR法檢測(cè)NF-κBp56的轉(zhuǎn)錄水平
        10 統(tǒng)計(jì)分析
    三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1 細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測(cè)結(jié)果
        2 IκBα酪氨酸磷酸化水平檢測(cè)結(jié)果
        3 細(xì)胞核內(nèi)NF-κB激活量
        4 抗氧化劑對(duì)低氧時(shí)IκBα磷酸化水平的影響
        5 酪氨酸蛋白激酶抑制劑對(duì)低氧時(shí)Mφ核內(nèi)NF-κB激活量的影響
        6 NF-κBp65轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)結(jié)果
    四、 討論
    小節(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
文獻(xiàn)綜述
碩士期間發(fā)表和待發(fā)表的文章及參加的學(xué)術(shù)會(huì)議


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[6]7000m急性低壓缺氧對(duì)T、B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)影響的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 高梅,王典瑞,徐斌,張曉秀,趙行宇.  航空軍醫(yī). 1998(03)
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本文編號(hào)：3201983