目的：探討低氧時淋巴細胞[Ca²⁺]i變化與淋巴細胞增殖活化的關(guān)系以及MφNF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活和對前炎癥因子TNF-α和IL-6的調(diào)控作用。以了解低氧對免疫細胞功能的影響及機制，闡明低氧性炎癥反應(yīng)的機理。方法：建立淋巴細胞和Mφ低氧培養(yǎng)模型；ELISA法檢測培養(yǎng)液中IL-2、TNF-α和IL-6的分泌水平；MTT法測定淋巴細胞轉(zhuǎn)化率；RT-PCR法觀察TNF-α、IL-6和p65轉(zhuǎn)錄水平；熒光分光光度法測定淋巴細胞[Ca²⁺]i變化和Mφ內(nèi)ROS水平；Western blotting法檢測Mφ胞漿內(nèi)IκBα的磷酸化水平和細胞核內(nèi)NF-κB的激活量。結(jié)果：①急性低氧后淋巴細胞[Ca²⁺]i下降，同時IgG、IL-2分泌量和淋巴細胞增殖率也明顯下降；低氧預(yù)處理后再進行急性低氧，發(fā)現(xiàn)上述指標(biāo)都恢復(fù)到與對照組相近的水平。②低氧后Mφ前炎癥因子TNF-α和IL-6分泌和轉(zhuǎn)錄水平增加，同時IκBα酪氨酸磷酸化水平、細胞核內(nèi)NF-κB激活量以及NF-κB P65轉(zhuǎn)錄水平增高。③抗氧化劑NAC可使IκBα酪氨酸磷酸化水平下降，酪... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 低氧及低氧預(yù)處理后淋巴細胞[Ca~(2+)]i變化與淋巴細胞增殖活化的關(guān)系
    一、 實驗材料
        1 主要儀器
        2 主要試劑
        3 實驗取材
    二、 實驗方法
        1 淋巴細胞分離培養(yǎng)
        2 實驗分組
        3 Fura-2／AM熒光分光光度法檢測[Ca~(2+)]i
        4 ELISA法檢測IgG
        5 ELISA法檢測IL-2
        6 MTT法檢測淋巴細胞增殖率
        7 統(tǒng)計分析
    三、 實驗結(jié)果
        1 細胞內(nèi)Ca~(2+)濃度檢測結(jié)果
        2 IgG分泌量檢測結(jié)果
        3 IL-2分泌量檢測結(jié)果
        4 淋巴細胞增殖率檢測結(jié)果
    四、 討論
    小節(jié)
第二部分 低氧對Mφ前炎癥因子分泌的影響
    一、 實驗材料
        1 主要儀器
        2 主要試劑
        3 實驗取材
    二、 實驗方法
        1 Mφ分離培養(yǎng)
        2 非特異性酯酶染色法鑒定Mφ
        3 實驗分組
        4 ELISA法檢測TNF-α
        5 ELISA法檢測IL-6
        6 Mφ總RNA分離與提取
        7 RNA濃度分析和純度鑒定
        8 甲醛變性電泳鑒定RNA完整性
        9 RT-PCR檢測TNF-α mRNA和IL-6 mRNA表達水平
        10 統(tǒng)計分析
    三、 實驗結(jié)果
        1 Mφ培養(yǎng)
        2 Mφ鑒定結(jié)果
        3 不同氧濃度條件下TNF-α和IL-6的分泌量
        4 不同低氧時間條件下TNF-α和IL-6的分泌量
        5 RNA純度鑒定的結(jié)果
        6 RNA完整性鑒定的結(jié)果
        7 不同氧濃度條件下TNF-α mRNA和IL-6.mRNA的表達量
        8 不同低氧時間條件下TNF-α mRNA和IL-6.mRNA的表達量
    四、 討論
    小節(jié)
第三部分 低氧后Mφ前炎癥因子分泌增加的機制-NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活
    一、 實驗材料
        1 主要儀器
        2 主要試劑
        3 實驗取材
    二、 實驗方法
        1 Mφ分離培養(yǎng)
        2 實驗分組及檢測指標(biāo)
        3 熒光分光光度法檢測細胞內(nèi)ROS水平
        4 胞漿蛋白提取方法
        5 細胞核內(nèi)蛋白提取方法
        6 考馬斯亮藍蛋白定量法
        7 Western blotting法檢測IκBα酪氨酸磷酸化水平
        8 Western blotting法檢測細胞核內(nèi)NF-κB激活量
        9 RT-PCR法檢測NF-κBp56的轉(zhuǎn)錄水平
        10 統(tǒng)計分析
    三、 實驗結(jié)果
        1 細胞內(nèi)ROS水平檢測結(jié)果
        2 IκBα酪氨酸磷酸化水平檢測結(jié)果
        3 細胞核內(nèi)NF-κB激活量
        4 抗氧化劑對低氧時IκBα磷酸化水平的影響
        5 酪氨酸蛋白激酶抑制劑對低氧時Mφ核內(nèi)NF-κB激活量的影響
        6 NF-κBp65轉(zhuǎn)錄水平檢測結(jié)果
    四、 討論
    小節(jié)
結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
文獻綜述
碩士期間發(fā)表和待發(fā)表的文章及參加的學(xué)術(shù)會議


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]核因子-κB反義寡核苷酸對系膜細胞炎癥因子基因表達的影響[J]. 丁桂霞,陳榮華,張愛華,吳元俊,潘曉勤.  腎臟病與透析腎移植雜志. 2002(02)
[3]自主神經(jīng)系統(tǒng)參與低氧下的免疫調(diào)節(jié)作用[J]. 白海波,杜繼曾,鄭筱祥.  中國應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2001(03)
[4]核因子κB（Nuclear Factor κB,NF-κB）:一個新的治療目標(biāo)[J]. 冷啟新,hotmail.com,劉執(zhí)玉,李瑞祥.  解剖科學(xué)進展. 1999(04)
[5]健康青年進駐高原血清TNF-α和IL-6的變化[J]. 崔建華,張西洲,何富文,王正理,周新梅,哈振德,趙升陽,張素萍.  西北國防醫(yī)學(xué)雜志. 1999(03)
[6]7000m急性低壓缺氧對T、B淋巴細胞增殖反應(yīng)影響的實驗研究[J]. 高梅,王典瑞,徐斌,張曉秀,趙行宇.  航空軍醫(yī). 1998(03)
[7]促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子介導(dǎo)低氧應(yīng)激抑制淋巴細胞轉(zhuǎn)化的實驗研究[J]. 白海波,杜繼曾.  中國應(yīng)用生理學(xué)雜志. 1995(03)



本文編號：3201983