目的構(gòu)建重組人免疫球蛋白D-Fc（IgD-Fc）片段蛋白,檢測IgD受體（IgDR）在健康人CD4⁺T細胞和T淋巴瘤細胞株Jurkat、MOLT-4上的表達情況,檢測IgD-Fc與IgD競爭結(jié)合CD4+T細胞表面IgDR的能力。方法采用PCR法得到人IgD-Fc目的基因,經(jīng)原核蛋白表達和層析純化,制備出重組人IgD-Fc片段蛋白。流式細胞術(shù)檢測IgDR在健康人CD4+T細胞和T淋巴瘤細胞株Jurkat、MOLT-4上的表達情況,以及IgD、重組人IgD-Fc片段蛋白與CD4+T細胞表面IgDR的競爭結(jié)合情況。結(jié)果成功構(gòu)建含IgD-Fc基因片段的原核表達載體p ET28a（+）/IgD-Fc,得到重組人IgD-Fc片段蛋白。CD4+T細胞及T淋巴瘤細胞株表面IgDR與IgD親和力相近,重組人IgD-Fc片段蛋白可與IgD競爭性結(jié)合IgDR。結(jié)論重組人IgD-Fc片段蛋白工藝成熟穩(wěn)定,可與IgD競爭性結(jié)合IgDR,可能成為針對IgD水平升高的自身免疫性疾病的新型治療藥物。 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學學報. 2019,54(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 樣本
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 方法
        1.3.1 pET28a (+) /IgD-Fc表達載體的構(gòu)建
            1.3.1.1 健康人外周血cDNA獲取
            1.3.1.2 IgD-Fc基因片段的擴增及重組表達載體的構(gòu)建
        1.3.2 重組人IgD-Fc片段蛋白的誘導表達
        1.3.3 重組人IgD-Fc片段蛋白的親和層析、分子篩純化及產(chǎn)物測定
        1.3.4 CD4+T細胞的分離、T淋巴瘤細胞株的培養(yǎng)
        1.3.5 外周血CD4+T細胞和T淋巴瘤細胞株表面IgDR的表達
        1.3.6 IgD與CD4+T細胞和T淋巴瘤細胞株表面IgDR的親和力實驗
        1.3.7 CD4+T細胞的IgDR競爭結(jié)合實驗
2 結(jié)果
    2.1 重組人IgD-Fc片段蛋白的表達、純化
        2.1.1 pET28a (+) /IgD-Fc原核表達載體構(gòu)建
        2.1.2 重組人IgD-Fc片段蛋白的表達
        2.1.3 重組人IgD-Fc片段蛋白的純化
    2.2 CD4+T細胞和T淋巴瘤細胞株表面IgDR的表達
    2.3 IgD與CD4+T細胞及T淋巴瘤細胞株表面IgDR的親和力
    2.4 重組人IgD-Fc片段蛋白、IgD與CD4+T細胞表面IgDR的競爭結(jié)合實驗
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]IgD對人外周血Th1/Th2、Th17/Treg亞群及核轉(zhuǎn)錄因子的影響[J]. 董小潔,吳育晶,張靜,陳文生,黃瓊,魏偉.  中國臨床藥理學與治療學. 2018(05)
[2]流式細胞術(shù)檢測IgD與IgD受體結(jié)合實驗方法的建立[J]. 陳恒石,吳育晶,黃瓊,陳文生,董進,魏偉.  安徽醫(yī)科大學學報. 2016(08)
[3]IgD在自身免疫病中作用的研究進展[J]. 陳文生,黃瓊,吳育晶,魏偉.  中國藥理學通報. 2014(03)



本文編號：3201115