目的研究多重耐藥鮑曼不動桿菌噬菌體Abp1毒力蛋白穿孔素holin（holinAbp1）的生物學特性及其對細菌的毒性作用,并通過無細胞蛋白表達系統(tǒng)對毒力蛋白穿孔素融合蛋白進行表達。方法利用生物信息學技術分析holinAbp1的蛋白結構特點,利用PCR技術從噬菌體Abp1基因組擴增holinAbp1基因,構建表達載體pET23bholinAbp1-gfp并轉化至大腸桿菌BL21（DE3）中以及無細胞蛋白體系中表達,利用Western印跡鑒定蛋白表達情況。結果噬菌體Abp1的holin蛋白屬于穩(wěn)定疏水性蛋白,含有3個跨膜區(qū)域,屬于Phage-holin-3-1家族,成功克隆了holinAbp1-gfp基因,holinAbp1-gfp蛋白在大腸桿菌內無法正確表達,對大腸桿菌表達宿主具有明顯抑制作用,而在無細胞蛋白表達系統(tǒng)實現了蛋白表達。結論通過無細胞蛋白表達系統(tǒng)實現了holinAbp1-gfp融合蛋白表達,將為毒力蛋白的表達和噬菌體治療藥物的研發(fā)提供應用基礎和技術支持。 

【文章來源】：軍事醫(yī)學. 2019,43(04)北大核心

【文章頁數】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 質粒、菌株與噬菌體
        1.1.2 試劑
    1.2 方法
        1.2.1 穿孔素的生物信息學分析
        1.2.2 質粒構建
        1.2.3 穿孔素融合蛋白對表達宿主生長抑制分析
        1.2.4 CFPS體系中細胞裂解液的制備
        1.2.5 無細胞蛋白表達
        1.2.6 CFPS表達穿孔素融合蛋白的Western印跡鑒定
        1.2.7 穿孔素融合蛋白的相對表達量分析
2結果
    2.1穿孔素holinAbp1的信息學分析
    2.2質粒構建
    2.3 holinAbp1-gfp對表達宿主生長抑制分析
    2.4 CFPS表達holinAbp1-gfp的Western印跡分析
3討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3194115