目的研究多重耐藥鮑曼不動桿菌噬菌體Abp1毒力蛋白穿孔素holin（holinAbp1）的生物學(xué)特性及其對細(xì)菌的毒性作用,并通過無細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)對毒力蛋白穿孔素融合蛋白進(jìn)行表達(dá)。方法利用生物信息學(xué)技術(shù)分析holinAbp1的蛋白結(jié)構(gòu)特點(diǎn),利用PCR技術(shù)從噬菌體Abp1基因組擴(kuò)增holinAbp1基因,構(gòu)建表達(dá)載體pET23bholinAbp1-gfp并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21（DE3）中以及無細(xì)胞蛋白體系中表達(dá),利用Western印跡鑒定蛋白表達(dá)情況。結(jié)果噬菌體Abp1的holin蛋白屬于穩(wěn)定疏水性蛋白,含有3個跨膜區(qū)域,屬于Phage-holin-3-1家族,成功克隆了holinAbp1-gfp基因,holinAbp1-gfp蛋白在大腸桿菌內(nèi)無法正確表達(dá),對大腸桿菌表達(dá)宿主具有明顯抑制作用,而在無細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了蛋白表達(dá)。結(jié)論通過無細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了holinAbp1-gfp融合蛋白表達(dá),將為毒力蛋白的表達(dá)和噬菌體治療藥物的研發(fā)提供應(yīng)用基礎(chǔ)和技術(shù)支持。 

【文章來源】：軍事醫(yī)學(xué). 2019,43(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 質(zhì)粒、菌株與噬菌體
        1.1.2 試劑
    1.2 方法
        1.2.1 穿孔素的生物信息學(xué)分析
        1.2.2 質(zhì)粒構(gòu)建
        1.2.3 穿孔素融合蛋白對表達(dá)宿主生長抑制分析
        1.2.4 CFPS體系中細(xì)胞裂解液的制備
        1.2.5 無細(xì)胞蛋白表達(dá)
        1.2.6 CFPS表達(dá)穿孔素融合蛋白的Western印跡鑒定
        1.2.7 穿孔素融合蛋白的相對表達(dá)量分析
2結(jié)果
    2.1穿孔素holinAbp1的信息學(xué)分析
    2.2質(zhì)粒構(gòu)建
    2.3 holinAbp1-gfp對表達(dá)宿主生長抑制分析
    2.4 CFPS表達(dá)holinAbp1-gfp的Western印跡分析
3討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]噬菌體在控制細(xì)菌感染中的臨床應(yīng)用[J]. 李婷華,郭曉奎.  中國抗生素雜志. 2018(08)
[2]全球抗生素耐藥性現(xiàn)狀分析及對策建議[J]. 王磊,曹巍.  軍事醫(yī)學(xué). 2017(05)
[3]無細(xì)胞蛋白合成體系實(shí)現(xiàn)胰島素原可溶性表達(dá)[J]. 胡元,張宇琛,徐焱成,劉天罡.  生物工程學(xué)報. 2017(03)
[4]戰(zhàn)創(chuàng)傷合并多重耐藥菌感染研究進(jìn)展[J]. 徐錫明,魏顯招,李明.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2014(03)
[5]含舒巴坦制劑聯(lián)合碳青霉烯類藥物治療泛耐藥鮑曼不動桿菌感染療效觀察[J]. 李艷,宋世平,尚學(xué)義,湯雪萍.  軍事醫(yī)學(xué). 2013(10)
[6]綠色熒光蛋白在藥物發(fā)現(xiàn)研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 劉程彬,宋宏銳,楊鵬.  沈陽藥科大學(xué)學(xué)報. 2013(04)
[7]MRSA和鮑曼不動桿菌抗藥基因檢測及對3種醇類消毒劑抗性研究[J]. 蘇裕心,魏秋華,任哲,張傳福,史云,武雪冰,帖金鳳,張文福.  軍事醫(yī)學(xué). 2012(11)
[8]1235例創(chuàng)傷并發(fā)創(chuàng)面感染的病原學(xué)調(diào)查[J]. 董葉麗,李桂馥.  中國微生態(tài)學(xué)雜志. 2012(08)
[9]λ噬菌體穿孔素（holin）蛋白觸發(fā)裂菌的分子機(jī)制[J]. 史一博,孫建和.  微生物學(xué)報. 2012(02)
[10]創(chuàng)傷感染控制的臨床認(rèn)識[J]. 史忠.  創(chuàng)傷外科雜志. 2011(02)



本文編號：3194115