本文關(guān)鍵詞：卵巢切除對(duì)家族性肌萎縮側(cè)索硬化動(dòng)物模型的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:肌萎縮側(cè)索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是一種大腦皮層、腦干和脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元選擇性受累的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,表現(xiàn)為肌肉漸進(jìn)性萎縮、無(wú)力、癱瘓和吞咽困難,并最終在2到5年內(nèi)因呼吸肌麻痹死亡。目前該病發(fā)病機(jī)制不清,但流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)ALS發(fā)病存在性別差異,這表明ALS發(fā)病的性別差異可能源于雌激素(Estrogen,E)對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用。有研究證明雌激素作為一種神經(jīng)保護(hù)因子在許多神經(jīng)變性模型中具有促進(jìn)神經(jīng)元生存,保護(hù)組織完整性的作用。神經(jīng)系統(tǒng)中的雌激素可以由局部組織的芳香化酶產(chǎn)生。數(shù)篇研究報(bào)道芳香化酶在腦內(nèi)有表達(dá),且腦內(nèi)雌激素的有效濃度及保護(hù)作用取決于腦局部芳香化酶的表達(dá)水平。以往有關(guān)于去卵巢后SOD1G93A轉(zhuǎn)基因鼠的發(fā)病影響的研究結(jié)果有爭(zhēng)議。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察去卵巢對(duì)SOD1G93A轉(zhuǎn)基因鼠發(fā)病時(shí)間、生存期及行為學(xué)影響,探討循環(huán)雌激素對(duì)脊髓前角神經(jīng)元的作用,并應(yīng)用免疫組化的方法觀察脊髓芳香化酶的表達(dá)情況初步探討卵巢切除對(duì)家族性肌萎縮側(cè)索硬化鼠模型的影響機(jī)制。方法:1模型建立及分組飼養(yǎng)繁殖家族型肌萎縮側(cè)索硬化動(dòng)物模型SOD1G93A轉(zhuǎn)基因雌性小鼠,隨機(jī)將40只5周齡攜帶SOD1G93A基因的小鼠分為三個(gè)實(shí)驗(yàn)組(n"g12只):分別為卵巢切除組(OVX)、假手術(shù)組(Sham)、陽(yáng)性對(duì)照組(NO-OVX)。陰性對(duì)照組(CON)組為同月齡未轉(zhuǎn)人突變的SOD1基因的小鼠。2發(fā)病時(shí)間和死亡時(shí)間的判定每天早晚各觀察一次轉(zhuǎn)基因鼠的一般狀況。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參考Vercelli等人研究的1-5分評(píng)分法[Vercelli A et al.,2008],評(píng)分為4分時(shí)定為發(fā)病時(shí)間,評(píng)分為1分時(shí)定為死亡時(shí)間。3行為學(xué)觀察應(yīng)用一般狀況評(píng)分、體重測(cè)量、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)、懸繩實(shí)驗(yàn)、步長(zhǎng)測(cè)量等對(duì)小鼠的行為學(xué)進(jìn)行觀察。4免疫組化染色固定的組織塊震蕩切片25μm厚,應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP的方法,觀察芳香化酶在SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠癥狀前期、癥狀期及終末期各個(gè)組腰段脊髓的表達(dá)分布特征。鏡下計(jì)數(shù)脊髓兩側(cè)前角芳香化酶免疫陽(yáng)性α運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)量,計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn):位于脊髓前角,d25微米,有明顯核仁。同時(shí)采用Im-age Pro Plus 6.0全自動(dòng)圖像分析系統(tǒng),測(cè)顯微鏡(10x10倍)下中央管至脊髓前角范圍內(nèi)芳香化酶的吸光度,每只小鼠選擇5張脊髓切片,計(jì)算每張切片的累積光密度值(IOD)。5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,數(shù)據(jù)的比較采用單因素方差分析或秩和檢驗(yàn),兩組數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn),以a=0.05為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果:1 SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定子代鼠基因組DNA(見(jiàn)Fig.1):位于200-300bp之間的條帶(236bp)為m SOD1的PCR產(chǎn)物,此種小鼠為SOD1G93A轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠。沒(méi)有此條帶為未轉(zhuǎn)基因小鼠即陰性小鼠。2發(fā)病時(shí)間和生存時(shí)間OVX組發(fā)病時(shí)間78.07±3.091天,與NO-OVX組92.50±3.907天相比,P=0.008。Sham組發(fā)病時(shí)間83.50±3.598天,與NO-OVX組92.50±3.907天相比,P=0.107。OVX組與Sham組相比P=0.26(見(jiàn)Table.1和Fig.2a)。OVX組的生存期137.71±2.352天,與NO-OVX組137.93±2.215天,相比P=0.738,Sham組生存期為132.08±2.932天,與NO-OVX組137.93±2.215天的相比,P=0.08均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05,見(jiàn)Table.1和Fig.2b)。3行為學(xué)3.1體重從第9周到第10周,四個(gè)實(shí)驗(yàn)分組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。從第11周到第14周只有OVX組與CON組小鼠有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。從第15周起三個(gè)陽(yáng)性組(OVX組、Sham組、NO-OVX組)與CON組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見(jiàn)Fig.3 a)。3.2懸吊實(shí)驗(yàn)從第9周到第10周,四個(gè)實(shí)驗(yàn)組的懸吊時(shí)間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。從第11周起至第20周三個(gè)陽(yáng)性組的懸吊時(shí)間與CON組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見(jiàn)Fig.3 b)。3.3轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)從第9周到第14周,四個(gè)實(shí)驗(yàn)組的轉(zhuǎn)棒時(shí)間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。第15周OVX組的轉(zhuǎn)棒時(shí)間與CON組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。從第16周到第20周轉(zhuǎn)棒時(shí)間三個(gè)陽(yáng)性組與CON組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。然而,OVX組與Sham組從始到尾均未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,OVX組與NO-OVX組也未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見(jiàn)Fig.3 c)。3.4步長(zhǎng)測(cè)量從第9周到第15周,四個(gè)實(shí)驗(yàn)組的步長(zhǎng)測(cè)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。從第16周到第20周三個(gè)陽(yáng)性組的步長(zhǎng)與CON組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。然而,OVX組與Sham組從始到尾均未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,OVX組與NO-OVX組也未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見(jiàn)Fig.3 d)。4免疫組化染色4.1癥狀前期,各組的芳香化酶在脊髓前角的表達(dá),主要分布于α運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞漿,膠質(zhì)細(xì)胞未見(jiàn)表達(dá)。陽(yáng)性神經(jīng)元計(jì)數(shù)分別為OVX 20.20±6.603,Sham 20.07±4.877,NO-OVX 17.07±4.978及CON 21.53±5.343,各組相比P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4個(gè)實(shí)驗(yàn)組IOD分別為:OVX 7516±2357,Sham 6493±2106,NO-OVX 5775±1543,CON 4904±1190,各組相比P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)Fig.4)。4.2癥狀期,CON組小鼠芳香化酶表達(dá)無(wú)明顯變化;OVX組、Sham組及NO-OVX組脊髓前角芳香化酶陽(yáng)性的α運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元減少,可見(jiàn)到膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的細(xì)胞表達(dá)。芳香化酶α運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目:OVX 8.27±4.543,Sham 6.87±2.973,NO-OVX 9.33±4.701,CON 18.73±5.063。應(yīng)用方差分析P0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。IOD分別為:OVX 4554±1797,Sham 5739±1382,NO-OVX 5933±2002,CON 4841±1965。應(yīng)用方差分析P0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見(jiàn)Fig.5)。4.3終末期,CON組小鼠芳香化酶仍在脊髓前角α運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元表達(dá);OVX組、Sham組及NO-OVX組脊髓前角芳香化酶陽(yáng)性的α運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元明顯減少,甚至消失,但可見(jiàn)到膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的細(xì)胞表達(dá)增加。芳香化酶α運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目:OVX 0.6±0.737,Sham 3.13±1.846,NO-OVX 2.20±1.568,CON22.53±3.642。OVX組與其它實(shí)驗(yàn)組比較P0.05,存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。IOD分別為:OVX 9502±2243,Sham 8072±2543,NO-OVX 8216±2002,CON 4740±1511。OVX組與Sham組比較P=0.007;OVX組與NO-OVX組比較P=0.024;其他兩兩比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見(jiàn)Fig.6)。結(jié)論:1卵巢切除可使SOD1-G93A轉(zhuǎn)基因鼠提前發(fā)病,但對(duì)生存期及其運(yùn)動(dòng)功能無(wú)明顯影響。2 SOD1G93A基因突變可以誘導(dǎo)脊髓前角的膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)芳香化酶。3卵巢切除可能導(dǎo)致SOD1G93A轉(zhuǎn)基因脊髓局部雌激素合成增加。
【關(guān)鍵詞】：肌萎縮側(cè)索硬化 SOD1G93A轉(zhuǎn)基因鼠 卵巢切除 行為學(xué) 免疫組化 芳香化酶
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R744.8;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫(xiě)13-14
• 前言14
• 材料與方法14-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-25
• 附表25-26
• 討論26-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-33
• 綜述 GPR30/GPER及其在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用33-49
• 參考文獻(xiàn)41-49
• 致謝49-50
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷50

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 羅鵬;邢方凱;武澤新;王磊;張吉強(qiáng);;雌激素替代療法改善老年癡呆的基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2011年23期

  本文關(guān)鍵詞：卵巢切除對(duì)家族性肌萎縮側(cè)索硬化動(dòng)物模型的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：317737