目的探討磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信號通路對負(fù)性共刺激分子B7-H4細(xì)胞定位的調(diào)控作用。方法體外培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染B7-H4/HEK293細(xì)胞,采用PI3K/AKT特異性抑制劑LY294002和/或出核轉(zhuǎn)運抑制劑來普霉素B（LMB）處理細(xì)胞之后,免疫熒光技術(shù)結(jié)合激光共聚焦顯微鏡檢測B7-H4蛋白在B7-H4/HEK293細(xì)胞中亞細(xì)胞定位的變化;Western20blot法檢測B7-H4蛋白在細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核表達(dá)水平的變化。結(jié)果激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果顯示,PI3K抑制劑LY294002作用于B7-H4穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的B7-H4/HEK293細(xì)胞后,與空白對照組相比,B7-H4發(fā)生核轉(zhuǎn)移,加入出核轉(zhuǎn)運抑制劑LMB后,核轉(zhuǎn)移的程度顯著增加;Western20blot法結(jié)果顯示,LY294002抑制PI3K/AKT信號通路活性2420h后,B7-H4在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中的定位均顯著降低（P<0.05）,而細(xì)胞核中B7-H4的定位顯著增加（P<0.05）。結(jié)論20PI3K/AKT信號通路可抑制B7-H4的核轉(zhuǎn)移。 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2014,30(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1材料
    1.2方法
        1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)和分組
        1.2.2免疫熒光技術(shù)檢測B7-H4在B7-H4/HEK293細(xì)胞的表達(dá)
        1.2.3 Western blot法檢測B7-H4在B7-H4/HEK293細(xì)胞的表達(dá)
        1.2.4統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 LY294002和LMB作用濃度和時間的確定
    2.2 免疫熒光檢測細(xì)胞中B7-H4的定位
    2.3 Western blot法檢測LY294002處理前后B7-H4總蛋白量
    2.4 Western blot法檢測LY294002處理前后B7-H4在細(xì)胞內(nèi)定位的變化
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]B7家族PD-L1和B7-H4的研究進(jìn)展[J]. 王輝,田波,魯常青.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2013(02)



本文編號：3176619