為了探討海馬神經(jīng)元中是否有Toll樣受體4（Toll-like receptor 4,TLR4）介導的Akt/FoxO3a/Bim信號通路,及該通路在海馬神經(jīng)元凋亡中的作用和機制,本實驗運用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）作用于原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元,利用不同的工具藥,以減弱或加強TLR4/Akt/FoxO3a/Bim通路的作用。應用CCK-8法檢測細胞活力,Western blot法檢測神經(jīng)元p-Akt（Ser473）、Akt、p-FoxO3a（Thr32）、FoxO3a、Bim、活化的Caspase-3蛋白的表達變化,real-time PCR法檢測海馬神經(jīng)元Bim的mRNA表達變化,免疫熒光法觀察FoxO3a核易位情況,流式細胞術檢測細胞凋亡率。結果顯示:LPS作用于海馬神經(jīng)元不同時間后,各組細胞活力均下降（P<0.05）,且具有一定的時間依賴性;LPS作用后p-Akt（Ser473）、p-FoxO3a（Thr32）表達減少,FoxO3a易位進入胞核,而促凋亡蛋白Bim及活化的Caspase-3表達增加,且海馬神經(jīng)元的凋亡率也增加（P<0.05... 

【文章來源】：生理學報. 2014,66(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 動物
        1.1.2 試劑與儀器
    1.2 方法
        1.2.1 海馬神經(jīng)元的原代培養(yǎng)及純度鑒定
        1.2.2 CCK8法檢測LPS對海馬神經(jīng)元活力的影響
        1.2.3 Western blot法測定海馬神經(jīng)元p-Akt(Ser473)、Akt、p-Fox O3a(Thr32)、Fox O3a、Bim、活化的Caspase-3蛋白的表達
        1.2.4 Real-time PCR法測定海馬神經(jīng)元Bim m RNA的表達
        1.2.5 細胞免疫熒光法觀察Fox O3a核易位
        1.2.6 Annexin V-PI雙染、流式細胞術檢測海馬神經(jīng)元的凋亡率
        1.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
2 結果
    2.1 海馬神經(jīng)元的原代培養(yǎng)與純度鑒定
    2.2 LPS對海馬神經(jīng)元活力的影響
    2.3 海馬神經(jīng)元p-Akt(Ser473)、p-Fox O3a(Thr32)、Bim以及活化的Caspase-3蛋白的表達
    2.4 海馬神經(jīng)元Bim的m RNA的表達變化
    2.5 Fox O3a核易位變化
    2.6 海馬神經(jīng)元的凋亡率
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Toll-like receptor 4-mediated signaling participates in apoptosis of hippocampal neurons[J]. Yue He,Ailing Zhou,Wei Jiang.  Neural Regeneration Research. 2013(29)
[2]Role of Toll-like receptor 4 in inflammatory reactions of hippocampal neurons[J]. Yae Hu,Jiahui Mao,Yu Zhang,Ailing Zhou.  Neural Regeneration Research. 2013(16)
[3]大鼠海馬神經(jīng)元TLR4介導的MyD88依賴途徑在神經(jīng)炎癥中的作用[J]. 張國霞,周愛玲,張貴萍,胡亞娥,茅家慧.  中國應用生理學雜志. 2013(01)
[4]Oxymatrine reduces neuroinflammation in rat brain A signaling pathway[J]. Jiahui Mao 1 , Yae Hu 1 , Ailing Zhou 1 , Bing Zheng 2 , Yi Liu 3 , Yueming Du 3 , Jia Li 3 , Jinyang Lu 3 , Pengcheng Zhou 3 1 Department of Pathophysiology, Medical School of Nantong University, Nantong 226001, Jiangsu Province, China 2 Department of Urology, the First People’s Hospital of Nantong, Nantong 226001, Jiangsu Province, China 3 Undergraduate of Medical School of Nantong University, Nantong 226001, Jiangsu Province, China.  Neural Regeneration Research. 2012(30)



本文編號：3170164