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PCR結(jié)合酶切分析鑒別皰疹病毒科四種病毒感染研究

發(fā)布時(shí)間:2021-04-25 11:16
  用DNAstar軟件包分別從HCMV、HSV-1、HSV-2和EBV的DNA聚合酶高保守基因區(qū)中設(shè)計(jì)一對(duì)共享序列引物,根據(jù)四種基因產(chǎn)物序列選擇Sma I 和 BamH I作為限制性內(nèi)切酶,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切,從而做到在一個(gè)方法中,經(jīng)一次PCR擴(kuò)增并結(jié)合酶切即可區(qū)分四種病毒的感染。應(yīng)用這一方法,分別檢測(cè)了臨床高危感染者血標(biāo)本、孕期可疑宮頸分泌物和尿配對(duì)標(biāo)本共99例,四種病毒擴(kuò)增的產(chǎn)物分別是HCMV 594bp、HSV-1與 HSV-2均為522bp、EBV 528bp。HSV-1被SmaI酶切形成478和44 bp兩個(gè)片段,但沒(méi)有BamH I酶切位點(diǎn);HSV-2被BamH I酶切后形成224和298bp兩個(gè)片段,沒(méi)有SmaI酶切位點(diǎn);EBV各有一個(gè)SmaI和 BamH 酶切位點(diǎn),分別切成101與427,246和282bp 四個(gè)片段;HCMV沒(méi)有兩種酶切位點(diǎn)。經(jīng)Southern印記、CC法金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比、原位雜交和與單一四種PCR試劑進(jìn)行了驗(yàn)證和評(píng)估,結(jié)果表明,單一PCR試劑盒和共享引物PCR酶切兩種試劑的檢測(cè)敏感性無(wú)明顯的差異(X2 =0.29, P>0.05),符合率達(dá)85.7%。... 

【文章來(lái)源】:青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】:52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

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討 論
小 結(jié)
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致 謝
綜 述
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