目的構(gòu)建含有人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（human Vascular endothelial growth factor,hVEGF121）和人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4（human Bone morphogenesia protein-4,hBMP-4）兩基因的真核雙表達(dá)質(zhì)粒,并鑒定。方法首先將hVEGF121通過定向克隆至真核雙表達(dá)質(zhì)粒pIRES一個(gè)多克隆位點(diǎn)中,命名為pIRES-hVEGF121。再將hBMP-4定向克隆至穿梭質(zhì)粒pShuttle CMV上,構(gòu)建pShuttle CMV-hBMP-4重組穿梭質(zhì)粒,最后通過重組穿梭質(zhì)粒將hBMP-4定向克隆至真核雙表達(dá)質(zhì)粒pIRES-hVEGF121上,完成真核雙表達(dá)載體pIRES- hVEGF121/hBMP-4的構(gòu)建,并作酶切鑒定。轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,提取總RNA和總蛋白,分別進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)其轉(zhuǎn)錄和Western blot檢測(cè)其蛋白表達(dá)。結(jié)果酶切證明pIRES-hVEGF121真核表達(dá)載體構(gòu)建正確;酶切證明pShuttle CMV-hBMP-4穿梭質(zhì)粒構(gòu)建正確;酶切證明真核雙表達(dá)載體pIRESh-VEGF121/hBMP-4構(gòu)建正確;RT... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 材料與方法
3. 結(jié)果
4. 討論
5. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨折愈合過程中BMP-2和VEGF的表達(dá)[J]. 曾中華,余黎,龔玲玲,肖璇,曾俊.  武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2005(04)
[2]人BMP-7及VEGF基因共表達(dá)腺病毒的構(gòu)建及在兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞中的共表達(dá)[J]. 魚兵,閆露,范清宇,龍華,文艷華.  中國(guó)矯形外科雜志. 2004(Z3)
[3]由BMP-4基因轉(zhuǎn)入C2C12細(xì)胞引起的成肌細(xì)胞到成骨細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)變（英文）[J]. 汪炬,孫奮勇,戴云,余榕捷,孫晉華,李明.  中國(guó)病理生理雜志. 2004(05)
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本文編號(hào)：3152316