目的:利用轉(zhuǎn)基因細(xì)胞法建立抗人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2,HER2）單抗的抗體依賴(lài)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC）生物學(xué)活性檢測(cè)方法。方法:利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系作為效應(yīng)細(xì)胞,SKBR3細(xì)胞系作為靶細(xì)胞,通過(guò)熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)（BioGloTM Luciferase Assay system）進(jìn)行抗HER2單抗的ADCC生物學(xué)活性檢測(cè),同時(shí)對(duì)試驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化及方法學(xué)驗(yàn)證,并將該檢測(cè)方法用于不同類(lèi)型的抗HER2單抗ADCC效應(yīng)的評(píng)價(jià)。結(jié)果:抗HER2單抗在該方法中存在量效關(guān)系,且符合四參數(shù)方程式:y=（A-D）/[1+（x/C）^B]+D,方法經(jīng)優(yōu)化后確定靶細(xì)胞為SKBR3細(xì)胞,抗體稀釋起始工作質(zhì)量濃度為4 000 ng·mL^-1,1∶4倍的稀釋倍數(shù),效靶比為15∶1,誘導(dǎo)時(shí)間為20 h。該方法具有良好的專(zhuān)屬性;3次獨(dú)立檢測(cè)的板間、日間最大誘導(dǎo)倍數(shù)（fo... 

【文章來(lái)源】：藥物分析雜志. 2019,39(01)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：11 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要儀器
    1.2 材料
    1.3 方法
        1.3.1 Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT細(xì)胞株的構(gòu)建
            1.3.1. 1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效應(yīng)細(xì)胞株
            1.3.1. 2 效應(yīng)細(xì)胞株的篩選
        1.3.2 ADCC生物學(xué)活性測(cè)定
        1.3.3 試驗(yàn)條件的優(yōu)化
            1.3.3. 1 靶細(xì)胞的選擇
                1.3.3. 1. 1 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同靶細(xì)胞表面HER2表達(dá)量
                1.3.3. 1. 2 不同HER2+靶細(xì)胞的免疫熒光檢測(cè)
                1.3.3. 1. 3 不同HER2+靶細(xì)胞的ADCC活性測(cè)定
            1.3.3. 2 抗體濃度范圍的選擇
            1.3.3. 3 效靶比的選擇
            1.3.3. 4 誘導(dǎo)時(shí)間的選擇
        1.3.4 方法學(xué)驗(yàn)證
            1.3.4. 1 專(zhuān)屬性試驗(yàn)
                1.3.4. 1. 1 靶細(xì)胞專(zhuān)屬性
                1.3.4. 1. 2 效應(yīng)細(xì)胞專(zhuān)屬性
                1.3.4. 1. 3 抗體專(zhuān)屬性
            1.3.4. 2 精密性試驗(yàn)
            1.3.4. 3 準(zhǔn)確性試驗(yàn)
        1.3.5 方法應(yīng)用
            1.3.5. 1 檢測(cè)不同類(lèi)型的抗HER2單抗的ADCC活性
            1.3.5. 2 檢測(cè)不同變性程度的抗HER2單抗的ADCC活性
                1.3.5. 2. 1 酶切變性試驗(yàn)
                1.3.5. 2. 2 熱穩(wěn)定性試驗(yàn)
2 結(jié)果
    2.1 Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT細(xì)胞株的構(gòu)建
    2.2 抗HER2單抗的ADCC劑量效應(yīng)曲線
    2.3 ADCC試驗(yàn)條件的優(yōu)化
        2.3.1 靶細(xì)胞的選擇
            2.3.1. 1 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同靶細(xì)胞表面HER2表達(dá)量
            2.3.1. 2 不同HER2 （+） 靶細(xì)胞的免疫熒光檢測(cè)
            2.3.1. 3 不同HER2+靶細(xì)胞的ADCC測(cè)定
        2.3.2 抗體濃度范圍的選擇
        2.3.3 效靶比的選擇
        2.3.4 誘導(dǎo)時(shí)間的選擇
    2.4 方法學(xué)驗(yàn)證
        2.4.1 專(zhuān)屬性
        2.4.2 精密性
        2.4.3 準(zhǔn)確性
    2.5 方法應(yīng)用
        2.5.1 對(duì)HER2靶點(diǎn)的不同類(lèi)型單克隆抗體類(lèi)藥物的ADCC活性比較
        2.5.2 對(duì)HER2靶點(diǎn)的不同變性程度的單克隆抗體藥物的ADCC活性比較
            2.5.2. 1 酶切變性
            2.5.2. 2 熱穩(wěn)定性試驗(yàn)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]針對(duì)HER2靶點(diǎn)的抗體藥物研究與腫瘤靶向治療[J]. 湯沁,丁倩,林莉,張珍珍,代爭(zhēng),詹金彪.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2012(10)
[2]乳腺癌HER2基因的研究進(jìn)展及其靶點(diǎn)治療[J]. 喬杉杉,王大業(yè).  首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2008(01)



本文編號(hào)：3151147