發(fā)布時(shí)間：2021-04-14 18:08

　　背景:前期研究發(fā)現(xiàn)miR-146-5p在染氟成骨細(xì)胞凋亡時(shí)表達(dá)上調(diào)。目的:構(gòu)建腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（TNF receptor associated factor 6,TRAF6）基因3’非編碼區(qū)（3’UTR）熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒,利用雙熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證miR-146-5p與其潛在靶基因TRAF6的靶向關(guān)系。方法:采用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)mi R-146-5p與TRAF6基因的結(jié)合位點(diǎn)。采用PCR技術(shù)擴(kuò)增TRAF6基因3’UTR片段,并克隆至p Yr-MirTarget載體,構(gòu)建野生型重組雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒。實(shí)驗(yàn)分6組:①6a-5p-核苷類似物+TRAF6野生型3’-UTR共轉(zhuǎn)組;②無核苷類似物對(duì)照+TRAF6野生型3’UTR共轉(zhuǎn)組（對(duì)照組）;③miR-146a-5p-抑制劑+TRAF6野生型;④TRAF6野生型3’-UTR轉(zhuǎn)染組;⑤p Yr-MirTarget空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組;⑥正常細(xì)胞組。分別將重組熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒與miR-146-5p和核苷類似物共轉(zhuǎn)染Saos-2,同時(shí)設(shè)置無核苷類似物對(duì)照、miR-146-5p抑制劑陰性對(duì)照和空載p Yr-MirTarget-W3’UTR、TRAF... 

【文章來源】：中國組織工程研究. 2019,23(27)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
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文題釋義:
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 設(shè)計(jì)
    1.2 時(shí)間及地點(diǎn)
    1.3 材料
    1.4 實(shí)驗(yàn)方法
        1.4.1 構(gòu)建熒光素酶報(bào)告基因載體
        1.4.2 miR-146a-5p與TRAF6-Luc共轉(zhuǎn)染
        1.4.3 雙熒光素酶活性檢測(cè)裂解細(xì)胞
        1.4.4 免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TRAF6蛋白表達(dá)
    1.5 主要觀察指標(biāo)
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果Results
    2.1 熒光素酶報(bào)告基因載體構(gòu)建結(jié)果
    2.2 載體轉(zhuǎn)染后熒光素酶活性
    2.3 免疫印跡檢測(cè)各組細(xì)胞TRAF6蛋白表達(dá)
3 討論Discussion


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]氟化鈉誘導(dǎo)人成骨細(xì)胞凋亡相關(guān)microRNA差異表達(dá)及分析[J]. 鄧強(qiáng),張亞樓,周楊俊杰,馬創(chuàng),盛偉斌.  中國組織工程研究. 2018(08)
[2]氟骨癥臨床與影像學(xué)診斷[J]. 馬國福.  影像研究與醫(yī)學(xué)應(yīng)用. 2017(12)
[3]mTOR自噬通路在染氟大鼠軟骨關(guān)節(jié)損傷中的作用[J]. 陳榮,于燕妮,徐淋,鄧超男.  中國地方病防治雜志. 2017(01)
[4]Nfic基因3′UTR雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建及其與miR-20a靶向關(guān)系的驗(yàn)證[J]. 王珊,李曉霞,周杰,王寶利.  天津醫(yī)藥. 2016(09)
[5]地方性氟骨癥治療的研究進(jìn)展[J]. 史睿亭,李維維,徐澤華.  生物技術(shù)世界. 2015(05)



本文編號(hào)：3137773