發(fā)布時間：2017-04-17 11:25

  本文關鍵詞：人參皂苷Rg1對帕金森病小鼠模型中腦黑質(zhì)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1與ErbB4表達的影響及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景帕金森病(Parkinson's Disease,PD)是一種常見的神經(jīng)退行性疾病,多發(fā)于50-60歲的中老年人,其典型的病理學特征為中腦黑質(zhì)致密區(qū)多巴胺能神經(jīng)元變性、缺失及Lewy小體的形成,其發(fā)病機制尚不明確。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(Neuregulin1,NRG1)在神經(jīng)元中主要通過激活ErbB家族的受體酪氨酸激酶ErbB4進行一系列信號傳導,從而在神經(jīng)發(fā)育過程和神經(jīng)元細胞功能中發(fā)揮重要作用,與許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關。人參皂苷Rg1具有抗神經(jīng)細胞凋亡和保護神經(jīng)元的作用,可以改善PD的癥狀,但是其作用的分子機制有待進一步研究。目的觀察人參皂苷Rg1對PD小鼠模型中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元中NRG1和ErbB4表達及活性的影響,探討MPTP誘導PD的分子機制,尋找預防和治療PD的新靶點。方法1.實驗分組:將40只C57BL/6小鼠隨機分為生理鹽水對照組、MPTP模型組、MPTP+人參皂苷Rg1組、MPTP+人參皂苷Rg1+H89組。2.模型制備:生理鹽水對照組和MPTP模型組小鼠腹腔注射0.9%生理鹽水(1ml/kg/d),MPTP+人參皂苷Rg1組和MPTP+人參皂苷Rg1+H89組小鼠腹腔注射人參皂苷Rg1(10mg/kg/d),連續(xù)3天。第4天,生理鹽水對照組繼續(xù)腹腔注射生理鹽水(1ml/kg),MPTP模型組,MPTP+人參皂苷Rg1組和MPTP+人參皂苷Rg1+H89組給予腹腔注射MPTP(20mg/kg),連續(xù)注射4次,每次間隔2小時。MPTP+人參皂苷Rg1+H89組在首次注射MPTP前30分鐘腹腔注射一次H89(1mg/kg)。3.游泳實驗:根據(jù)游泳實驗評分標準,對各組小鼠在不同時間點游泳時肢體的協(xié)調(diào)能力做出評分,評價各組小鼠的行為學變化。4.病理形態(tài)學觀察:HE染色,光鏡下觀察小鼠黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元形態(tài)及數(shù)量的變化。5.RT-PCR法:檢測黑質(zhì)中NRG1與ErbB4 mRNA的表達變化。6.Western印跡法:檢測ErbB4和其磷酸化p-ErbB4的蛋白表達變化。結果1.一般行為學變化MPTP模型組小鼠在第2次注射MPTP后一小時內(nèi)出現(xiàn)不同程度的豎毛、翹尾、打轉(zhuǎn)等癥狀,在4次MPTP注射完后,小鼠出現(xiàn)肌肉震顫,尾巴僵直,步態(tài)不穩(wěn),行動減少等癥狀,24h后,上述癥狀基本消失;MPTP+人參皂苷Rg1+H89組在給予H89和MPTP注射后,也出現(xiàn)了不同程度的豎毛、翹尾、肌肉震顫、步態(tài)蹣跚等癥狀,而MPTP+人參皂苷Rg1組與這兩組相比,上述癥狀明顯出現(xiàn)的晚且輕,生理鹽水對照組小鼠行為正常,未出現(xiàn)上述癥狀。2.游泳實驗MPTP模型組小鼠在不同時間點的游泳實驗分值均顯著低于生理鹽水對照組(P0.05);MPTP+人參皂苷Rg1組小鼠的游泳實驗分值均顯著高于模型組(P0.05);MPTP+人參皂苷Rg1+H89組與MPTP+人參皂苷Rg1組相比,游泳實驗分值均降低(P0.05);而MPTP+人參皂苷Rg1+H89組與MPTP模型組相比,均無顯著性差異(P0.05)。3.小鼠中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元病理形態(tài)學變化光鏡下可見,與生理鹽水對照組相比,MPTP模型組黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的軸突變短,數(shù)量變少。MPTP模型組的黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量(32.461±1.170)顯著低于生理鹽水對照組(40.334±0.845,t=-13.452,P=0.000);MPTP+人參皂苷Rg1組的黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量(35.925±0.681)顯著高于模型組(t=-7.23,P=0.003);MPTP+人參皂苷Rg1+H89組的黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量(33.648±0.966)顯著低于MPTP+人參皂苷Rg1組(t=3.230,P=0.008);MPTP+人參皂苷Rg1+H89組與MPTP模型組相比,無顯著性差異(t=2.274,P=0.892)。方差分析表明組間差異有統(tǒng)計學意義(F=41.234,P=0.000)。4.RT-PCR MPTP模型組的Nrg1 mRNA表達水平(0.460±0.1704)顯著低于生理鹽水對照組(1.000±0.0000,t=6.339,P=0.0079);MPTP+人參皂苷Rg1組Nrg1 mRNA表達水平(0.925±0.1681)顯著高于MPTP模型組(t=3.199,P=0.0494);MPTP+人參皂苷Rg1+H89組Nrg1 mRNA的表達水平(0.648±0.1967)與MPTP+人參皂苷Rg1組相比,顯著下降(t=1.916,P=0.0499);Nrg1 mRNA在MPTP+Rg1+H89組與MPTP模型的表達無顯著性差異(t=1.134,P=0.3391)。方差分析表明組間差異有統(tǒng)計學意義(F=8.023 0,P=0.0211)。Nrg1-type I/II mRNA在MPTP模型組(0.376±0.1201)的表達水平顯著低于生理鹽水對照組(1.000±0.0000,t=10.400,P=0.0019);MPTP+人參皂苷Rg1組Nrg1-type I/II mRNA表達水平(0.766±0.1382)顯著高于MPTP模型組(t=3.377,P=0.0432);MPTP+人參皂苷Rg1+H89組(0.310±0.2898)與MPTP+人參皂苷Rg1組相比,Nrg1-type I/II mRNA表達下降(t=3.150,P=0.0513);MPTP+人參皂苷Rg1+H89組與MPTP模型組相比,Nrg1-type I/II mRNA表達水平無顯著性差異(t=0.3319,P=0.7618)。方差分析表明組間差異有統(tǒng)計學意義(F=12.46,P=0.0187)。Nrg1-type III mRNA在MPTP+人參皂苷Rg1組的表達水平(1.121±0.1812)顯著高于MPTP模型組(t=3.419,P=0.0419)。5.Western blot方差分析表明,各組小鼠中腦黑質(zhì)內(nèi)ErbB4總的蛋白表達水平?jīng)]有顯著性差異(F=0.1578,P=0.8005)。MPTP模型組磷酸化ErbB4蛋白的表達水平(0.339±0.1339)顯著低于生理鹽水對照組(1.000±0.0000,t=8.548,P=0.0134);MPTP+人參皂苷Rg1組磷酸化ErbB4蛋白的表達水平(0.782±0.1369)顯著高于MPTP模型組(t=6.986,P=0.0199);MPTP+人參皂苷Rg1+H89組磷酸化ErbB4蛋白的表達水平(0.365±0.2677)顯著低于MPTP+人參皂苷Rg1組(t=4.407,P=0.0478)。方差分析表明組間差異有統(tǒng)計學意義(F=17.04,P=0.0282)。結論1.MPTP可能通過降低NRG1及其受體ErbB4的表達及活性誘導C57BL/6小鼠發(fā)生PD。2.人參皂苷Rg1可能通過激活小鼠中腦黑質(zhì)NRG1/ErbB4的活性而改善其PD癥狀。
【關鍵詞】：帕金森病 人參皂苷Rg1 神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1 成紅細胞白血病病毒癌基因同源物4
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R742.5;R-332
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-13
• 前言13-17
• 1 材料及方法17-28
• 2 結果28-40
• 3 討論40-43
• 4 小結43-44
• 參考文獻44-48
• 綜述 NRG/ErbB信號通路在神經(jīng)系統(tǒng)中的研究48-67
• 參考文獻60-67
• 附錄 英文縮略詞67-69
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況69-70
• 致謝70-71
• 個人簡歷71

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本文編號：313131