目的:通過(guò)λRed重組系統(tǒng)構(gòu)建鼠傷寒沙門菌質(zhì)粒毒力基因（Salmonella plasmid virulence gene,spv）spv C敲除株STM-Δspv C,并利用原核表達(dá)載體p BAD/gⅢ構(gòu)建spv C回補(bǔ)株STM-c-spv C。以鼠傷寒沙門菌（Salmonella enterica serovar Typhimurium,S.typhimurium,STM）野生株STM-WT和所構(gòu)建菌株作為受試菌,建立斑馬魚和He La細(xì)胞感染模型,研究spv C在感染過(guò)程中對(duì)宿主細(xì)胞自噬的影響,并探究其可能的作用機(jī)制,為通過(guò)調(diào)控細(xì)胞自噬來(lái)預(yù)防和控制沙門菌感染提供新的思路和方法。方法:一、沙門菌質(zhì)粒毒力基因spv C敲除株和回補(bǔ)株的構(gòu)建1.利用λRed重組系統(tǒng)構(gòu)建spv C敲除株根據(jù)spv C基因上下游序列設(shè)計(jì)5’端含有spv C同源序列的引物,以質(zhì)粒p KD4為模板,擴(kuò)增得到兩側(cè)含F(xiàn)RT位點(diǎn)、中間為卡那霉素抗性基因的線性DNA片段。同時(shí)利用已電轉(zhuǎn)入質(zhì)粒p KD46的STM-WT菌株,經(jīng)L-阿拉伯糖誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,使其具有同源重組的能力。將線性DNA片段電轉(zhuǎn)入具重組功能的感受態(tài)S... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文提要
Abstract
引言
第一部分 鼠傷寒沙門菌質(zhì)粒毒力基因spvC敲除株的構(gòu)建
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第二部分 沙門菌質(zhì)粒毒力基因spvC對(duì)斑馬魚感染過(guò)程和自噬的影響
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第三部分 沙門菌質(zhì)粒毒力基因spvC對(duì)HeLa細(xì)胞自噬的影響及機(jī)制探討
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
英文縮略詞表
攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表論文
學(xué)術(shù)會(huì)議報(bào)告
本課題所獲的基金資助
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用λRed重組系統(tǒng)敲除鼠傷寒沙門氏菌sopB基因[J]. 李曄,張西軒,郭夢(mèng)征,王素英,張坤生,阮海華.  生物技術(shù)通報(bào). 2014(09)
[2]工業(yè)微生物代謝途徑調(diào)控的基因敲除策略[J]. 于慧敏,馬玉超.  生物工程學(xué)報(bào). 2010(09)



本文編號(hào)：3117374