目的探討TLR4對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的支氣管上皮16HBE細(xì)胞損傷的影響及其機(jī)制。方法將3條siRNA-TLR4-1、siRNA-TLR4-2和siRNA-TLR4-3轉(zhuǎn)染至16HBE細(xì)胞中,篩選出最佳的siRNA-TLR4干擾序列進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為對照組（未處理）、LPS組（給予50μg/ml LPS處理）、LPS+siNC組（轉(zhuǎn)染siRNA-NC后給予50μg/ml LPS處理）和LPS+siTLR4組（分別轉(zhuǎn)染設(shè)計(jì)的3條siRNA-TLR4后給予50μg/ml LPS處理）,采用RT-PCR檢測TLR4、IL-6和TNF-αmRNA的表達(dá),MTT法檢測細(xì)胞活力,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,Western Blot檢測Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κB p65和IκBα蛋白的表達(dá)。多組間比較使用單因素方差分析,組間多重比較采用SNK-q,兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。結(jié)果 LPS組與LPS+siTLR4-2組TLR4 mRNA（2.05±0.12,3.28±0.15）和蛋白表達(dá)（0.38±0.03,0.77±0.05）比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1... 

【文章來源】：中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版). 2019,9(03)

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【部分圖文】：

WesternBlot檢測TLR4蛋白的表達(dá)結(jié)果

·170·中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版)2019年6月第9卷第3期ChinJCellStemCell(ElectronicEdition),June2019,Vol.9,No.3注：a圖為對照組，b圖為LPS組，c圖為LPS+siNC組，d圖為LPS+siTLR4組圖2流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡蛋白IκBα（t1=10.493，t2=11.418，t3=7.407，P均<0.01）表達(dá)水平降低，而NF-κBp65（t1=10.540，t2=11.418，t3=4.977，P均<0.01）蛋白的表達(dá)升高（P均<0.05）；與LPS組比較，LPS+siNC組中IκBα（t=0.926，P=0.382）和NF-κBp65（t=0.878，P=0.405）蛋白的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05），但LPS+siTLR4組中IκBα（t=3.086，P=0.015）蛋白表達(dá)升高，而NF-κBp65（t=5.563，P=0.001）蛋白表達(dá)降低（P均<0.05）。（圖4，表5）圖3WesternBlot檢測Bcl-2、Bax和CleavedCaspase-3蛋白的表達(dá)圖4WesternBlot檢測IκBα和NF-κBp65蛋白的表達(dá)表4各組16HBE細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平（n=3，x±s）分組Bcl-2BaxCleavedCaspase-3對照組0.69±0.060.11±0.020.13±0.02LPS組0.28±0.03a0.48±0.05a0.75±0.06aLPS+siNC組0.25±0.03a0.52±0.05a0.77±0.05aLPS+siTLR4組0.40±0.03ab0.33±0.02ab0.38±0.03abF值76.76271.310154.851P值<0.01<0.01<0.01注：與對照組相比，aP<0.05；與LPS組相比，b

NF-κBp65（t1=10.540，t2=11.418，t3=4.977，P均<0.01）蛋白的表達(dá)升高（P均<0.05）；與LPS組比較，LPS+siNC組中IκBα（t=0.926，P=0.382）和NF-κBp65（t=0.878，P=0.405）蛋白的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05），但LPS+siTLR4組中IκBα（t=3.086，P=0.015）蛋白表達(dá)升高，而NF-κBp65（t=5.563，P=0.001）蛋白表達(dá)降低（P均<0.05）。（圖4，表5）圖3WesternBlot檢測Bcl-2、Bax和CleavedCaspase-3蛋白的表達(dá)圖4WesternBlot檢測IκBα和NF-κBp65蛋白的表達(dá)表4各組16HBE細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平（n=3，x±s）分組Bcl-2BaxCleavedCaspase-3對照組0.69±0.060.11±0.020.13±0.02LPS組0.28±0.03a0.48±0.05a0.75±0.06aLPS+siNC組0.25±0.03a0.52±0.05a0.77±0.05aLPS+siTLR4組0.40±0.03ab0.33±0.02ab0.38±0.03abF值76.76271.310154.851P值<0.01<0.01<0.01注：與對照組相比，aP<0.05；與LPS組相比，bP<0.05

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]茶多酚對脂多糖誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制[J]. 劉翠翠,趙龍,石曉嵐,王寧,馬彩玲.  中國兒童保健雜志. 2017(10)
[2]TLR4在LPS誘導(dǎo)的大鼠肝內(nèi)膽管組織損傷中的作用及機(jī)制[J]. 閆鵬展,趙禮金,涂奎,顧進(jìn),王芳.  山東醫(yī)藥. 2017(24)
[3]TLR4在脂多糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞MAPK信號通路中的作用及其機(jī)制[J]. 吳乙偲,鄭世翔,陳星華,顏奇,楊紅霞,丁國華.  武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2016(05)



本文編號：3090563