本文關(guān)鍵詞：對乙酰氨基酚誘發(fā)小鼠肝臟黑化機制及其無脊椎動物快速檢測模型，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：對乙酰氨基酚(APAP)是臨床廣泛使用的高效解熱鎮(zhèn)痛類非處方藥。隨意性和復方使用過量APAP類藥物引起的肝毒性,在包括美國在內(nèi)的許多國家已經(jīng)成為急性肝衰竭(ALF)的主要原因之一。本文以哺乳類小鼠以及無脊椎模式動物家蠶為模型,發(fā)現(xiàn)了APAP誘導小鼠ALF發(fā)生前出現(xiàn)的肝臟黑化現(xiàn)象,進一步在家蠶體內(nèi)觀察到具有時間和劑量效應的APAP誘導的體表黑化現(xiàn)象,并以解毒代謝組織脂肪體模擬小鼠肝臟復制出APAP誘發(fā)的ALF,系統(tǒng)研究和平行比較了兩種動物模型APAP誘發(fā)的黑化作用生化機制。相關(guān)結(jié)果如下:1 APAP引起家蠶脂肪體與小鼠肝臟相似的急性損傷家蠶皓月品種5齡48 h幼蟲,以及體重20 g左右的ICR小鼠,經(jīng)口給藥APAP后0.5 h-2 h,HPLC方法在小鼠循環(huán)血液(血漿)與肝臟,家蠶循環(huán)血淋巴(血漿)以及脂肪體中追蹤到APAP原藥快速出現(xiàn),并且都呈現(xiàn)典型的時間/劑量效應,其中家蠶無論是血漿還是脂肪體中原藥的含量均顯著高于小鼠血漿和肝臟。經(jīng)口給藥APAP后16 h,組織HE染色切片觀察結(jié)果表明,150 mg/kg以上劑量誘導了小鼠肝臟細胞的急性壞死性損傷,并且有顯著的劑量效應;家蠶脂肪體在劑量達3600 mg/kg時能夠觀察到急性壞死性損傷。血漿中典型急性肝衰竭酶活性指標測定結(jié)果顯示,兩種動物模型的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和堿性磷酸酶(ALP)活性,伴隨著肝臟/脂肪體細胞急性壞死性損傷而顯著升高。顯示高濃度的APAP暴露,能夠誘發(fā)小鼠的肝臟以及家蠶的脂肪體發(fā)生相似的急性壞死性損傷,表明家蠶脂肪體能夠替代小鼠的肝臟開展APAP的組織損傷機制研究。2黑化是肝臟/脂肪體損傷的可靠指標探究小鼠肝臟以及家蠶脂肪體發(fā)生損傷的同時,是否有更為便捷的外觀檢測方法。結(jié)果顯示,小鼠經(jīng)口給藥600 mg/kg APAP時肝臟發(fā)生了黑化,給藥后0 h-4 h黑化程度不斷增加,隨后逐漸減弱,至給藥后32 h肝臟組織恢復至對照程度,呈典型的時間-劑量效應,觀察其體表顏色無明顯變化。家蠶經(jīng)口給藥APAP后,脂肪體顏色未見明顯改變但體表出現(xiàn)黑斑,且劑量越大,黑斑黑化程度越嚴重,黑化出現(xiàn)的時間越早,具有典型的時間-劑量效應。小鼠經(jīng)口給藥APAP后1 h-32 h,對血漿以及肝臟黑色素含量進行調(diào)查,結(jié)果顯示處理組黑色素含量明顯高于對照組,呈時間-劑量效應;家蠶經(jīng)口給藥APAP后,高劑量處理組黑色素生成限速酶酚氧化酶(PO)的活性在給藥后0.5 h-4 h顯著高于對照組,隨后逐漸恢復。表明,伴隨著肝臟/脂肪體受損的同時,小鼠的循環(huán)血液和肝臟中出現(xiàn)了黑色素積累與肝臟黑化,而家蠶在循環(huán)血液中出現(xiàn)黑色素合成代謝增強的同時,體色黑化能夠顯示APAP暴露后脂肪體的同步損傷。3小鼠和家蠶黑色素形成代謝通路的比較經(jīng)口給藥APAP后1 h-8 h,HPLC方法測定血漿中黑色素代謝起始底物苯丙氨酸(Phe)以及酪氨酸(Tyr)的含量,得出無論在小鼠還是家蠶中暴露APAP組與對照組相比Phe含量均先下降,但在動物適應性恢復后,Phe含量出現(xiàn)升高,其中小鼠的恢復速度快于家蠶;Tyr的含量先升高后下降,其中家蠶開始下降的時間和下降幅度顯著快/大于小鼠。結(jié)果表明APAP誘導了從Phe生成Tyr的代謝水平升高。對Tyr的下游代謝通路進行調(diào)查,結(jié)果顯示小鼠經(jīng)口給藥APAP后4 h,血漿中腎上腺素(EPI)含量明顯高于對照組,表明APAP誘導的Tyr既用于形成黑色素也合成EPI。家蠶Tyr用于形成多巴,多巴進一步代謝為多巴胺和多巴醌,APAP處理后的家蠶血漿中多巴含量減少,而多巴胺的含量顯著增加,表明在家蠶體內(nèi)APAP誘導多巴胺通路代謝活性也得到顯著提升,最終代謝生成黑色素;而小鼠體內(nèi)多巴胺支路形成了EPI,只有多巴醌支路最終合成了黑色素。因此,暗示使用家蠶動物模型比小鼠具有更高靈敏性來評判APAP誘導的黑色素生成代謝影響。本文結(jié)論:高劑量APAP誘導的哺乳動物肝臟急性衰竭損傷之前,循環(huán)血中黑色素生成代謝水平顯著升高并伴隨出現(xiàn)肝臟黑化。無脊椎模式動物家蠶的體表黑化面積有望成為檢測APAP類藥物組織代謝毒性的敏感外觀指標。
【關(guān)鍵詞】：對乙酰氨基酚 肝毒性 黑化 動物模型
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 序論11-32
• 1 文獻綜述11-29
• 1.1 急性肝衰竭11-17
• 1.2 急性肝衰竭動物疾病模型17-23
• 1.3 黑色素與體色23-29
• 2 研究目的與研究內(nèi)容29-30
• 2.1 研究目的和意義29-30
• 2.2 主要研究內(nèi)容30
• 3 研究技術(shù)路線30-32
• 第二章 APAP誘發(fā)小鼠肝臟黑化機制及其無脊椎動物快速檢測模型32-65
• 1 實驗材料與方法32-47
• 1.1 實驗動物32-33
• 1.2 實驗動物的處理33-34
• 1.3 主要試劑及試劑盒34-35
• 1.4 主要儀器設備35-36
• 1.5 實驗方法36-47
• 1.6 數(shù)據(jù)分析軟件47
• 2 結(jié)果與分析47-63
• 2.1 APAP原藥在體內(nèi)的轉(zhuǎn)移47-49
• 2.2 APAP引起了家蠶脂肪體與小鼠肝臟相似的組織損傷49-51
• 2.3 黑化是肝臟/脂肪體損傷的指標51-57
• 2.4 小鼠和家蠶黑色素形成代謝通路的比較57-61
• 2.5 家蠶血漿中GSH含量與黑色素形成的關(guān)系61-63
• 3 討論63-65
• 第三章 結(jié)論65-67
• 1 結(jié)論65
• 2 論文創(chuàng)新點65
• 3 后續(xù)研究展望與建議65-67
• 參考文獻67-78
• 發(fā)表論文與參與項目78-80
• 攻讀學位期間公開發(fā)表論文78
• 攻讀學位期間國際會議發(fā)表論文78
• 攻讀學位期間投稿論文78-79
• 攻讀學位期間參與項目79-80
• 附錄80-85
• 附錄1 文中主要縮略詞表80-81
• 附錄2 小鼠（MUS）與家蠶（BM）血漿中游離氨基酸含量81-85
• 致謝85-87

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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  本文關(guān)鍵詞：對乙酰氨基酚誘發(fā)小鼠肝臟黑化機制及其無脊椎動物快速檢測模型，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：306845