為了探討轉(zhuǎn)錄調(diào)控子Rcs AB對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用,構(gòu)建肺炎克雷伯菌RcsA和RcsB的重組質(zhì)粒,之后誘導(dǎo)蛋白表達(dá),提取純化后測(cè)定其活性。PCR得到rcsA、rcsB片段,分別將兩DNA片段克隆至表達(dá)載體pMAL-C5X、pET28a,構(gòu)建重組質(zhì)粒。再將重組質(zhì)粒導(dǎo)入E. coli BL21（DE3）菌株中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后收集菌體,超聲破碎。破碎后的上清過(guò)柱、透析純化,得到高純度的蛋白,通過(guò)EMSA進(jìn)行蛋白活性鑒定。RcsA,RcsB蛋白成功表達(dá)純化,并能夠與靶基因結(jié)合,初步證明蛋白具有生物學(xué)活性。成功制備有生物學(xué)活性的RcsA、RcsB蛋白,為進(jìn)一步研究RcsAB蛋白復(fù)合物特異的生物學(xué)功能提供物質(zhì)基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2019,38(02)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 結(jié)果與分析
    1.1 成功構(gòu)建重組質(zhì)粒
    1.2 蛋白的表達(dá)與純化
    1.3 RcsAB活性鑒定
2 討論
3 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 菌株、質(zhì)粒與引物
        3.1.2 主要儀器與試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 目的蛋白的表達(dá)和純化
        3.2.3 RcsAB的靶基因片段制備
        3.2.4 EMSA測(cè)蛋白活性
作者貢獻(xiàn)



本文編號(hào)：3056098